Μέτρηση μικρά, κακώς σκέδαση μόρια σε λύση ήταν πάντα μια πρόκληση για τα δυναμικά συστήματα σκέδαση φωτός. Να πάρει την απόλυτη ευαισθησία και στο παρελθόν έχει απαιτήσει ένα εξειδικευμένο οπτικό set-up αφιερωμένη σε αυτό το είδος της μέτρησης, ή μια ισχυρή πηγή λέιζερ που είναι δημοφιλής λόγω της πολυπλοκότητας και του κόστους της. Το παρόν σημείωμα εφαρμογής δείχνει πώς η Malvern ΥΗΣ μπορούν να φτάσουν αυτές τις ευαισθησίες και να διατηρήσουν ένα ευρύ φάσμα εφαρμογών. Λυσοζύμη Η λυσοζύμη είναι ένα ένζυμο που βρίσκεται στο ανθρώπινο δάκρυα και το σάλιο, και είναι υπεύθυνη για τη δολοφονία βακτηριακά κύτταρα. Ανακαλύφθηκε από τον Αλέξανδρο Φλέμινγκ το 1922, και έγινε γνωστή ως το πρώτο αντιβιοτικό. Ήταν η πρώτη πρωτεΐνη να έχει τη δομή της καθορίζεται, όπως βρέθηκε να είναι συμπαγής και σχεδόν σφαιρικό. Το γεγονός αυτό σε συνδυασμό με το μικρό του μέγεθος και η εύκολη πρόσβαση κάνει λυσοζύμη μια εξαιρετική επιλογή για να ερευνήσουμε την ευαισθησία του για το δυναμικό σύστημα σκέδαση φωτός. Ο εξοπλισμός που χρησιμοποιείται Malvern ΥΗΣ. Λυσοζύμη (Merck), 0,1 μοριακή νάτριο-acetate buffer (pH 4.25), μίας χρήσης πλαστική σύριγγα, 0.2μm σύριγγα φίλτρο, τετράγωνο γυάλινο κυψελίδα. Προετοιμασία δείγματος και η μέτρηση Παρά το γεγονός ότι μόνο 15μg του δείγματος είναι απαραίτητη για μια μέτρηση, για να επιτρέπει την ακριβή συγκέντρωση να είναι προετοιμασμένοι, 100 mg λυσοζύμη διαλύθηκε σε ρυθμιστικό διάλυμα 1000ml νάτριο-acetate. 0,2 mL ήταν φιλτράρεται μέσω ενός φίλτρου σύριγγας 0,2 μm σε ένα καθαρό, χωρίς σκόνη κυψελίδα γυαλί. Αυτό αποτελεί μια Λυσοζύμη συγκέντρωση μονομερείς 0.1mg/ml. Το γυαλί κυψελίδα εισήχθη στη μονάδα και η θερμοκρασία αφήνεται να ισορροπήσει για 3 λεπτά πριν από μια μέτρηση 300s έγινε. Αποτελέσματα Μέγεθος Η συνάρτηση συσχέτισης στο παρακάτω διάγραμμα δείχνει ότι τα δεδομένα είναι αρκετά καλή για τον υπολογισμό του μέσου μεγέθους και πολυδιασπαρσιμότητας του λυσοζύμη, και ένδειξη της κατανομής του μεγέθους είναι εφικτή.  | Σχήμα 1. Κατανομή μεγέθους σωματιδίων του δείγματος λυσοζύμη. |
Παρά τη χαμηλή συγκέντρωση, η διάμετρος της μονομερούς 4nm ήταν να μετρηθεί με εξαιρετική ακρίβεια. Επιπλέον, τα αδρανή υλικά, τα οποία είναι εξαιρετικά δύσκολο να αποφευχθεί με αυτές τις μικρές και αραιώστε τα δείγματα, ήταν μετρήσιμοι, καθώς, η συμβολή μάζα αυτών των μεγεθών μετρήθηκε να είναι μικρότερη από 0,3%. Αυτό δείχνει ότι είναι εφικτό να μετρηθεί το μέγεθος των 15μg λυσοζύμης. Επιβεβαίωση των αποτελεσμάτων Χρησιμοποιώντας Η ένταση της σκέδασης Η συγκέντρωση του δείγματος των 0,1 mg / ml μπορεί να επιβεβαιωθεί, και κατά τεκμήριο το αποτέλεσμα επικυρώνονται με σύγκριση της συγκέντρωσης αυτής με την αξία που υπολογίζεται από την ένταση διασπορά του δείγματος. Η ανιχνεύεται ποσοστό καταμέτρηση φωτονίων της λύσης μετρήθηκε ως 29kcps (Ποσά σε χιλ. μετράει ανά δευτερόλεπτο). Η σκέδαση από το διαλυτικό μετρήθηκε ως 20,1 kcps, η οποία δίνει 8,9 kcps όπως η σκέδαση, λόγω της μονομερούς λυσοζύμη. Μπορούμε να ρυθμίσετε την ένταση σκέδασης με ένα πρότυπο των γνωστών Λόγος Rayleigh, στην περίπτωση αυτή το τολουόλιο, το οποίο έδωσε ένα ποσοστό καταμέτρηση των 220kcps. Λαμβάνοντας το dn / dc για τη λυσοζύμη και 0,2 σε μήκος κύματος 632.8nm, και ένα Mw μονομερές 14.400 Dalton, η συγκέντρωση υπολογίστηκε σε 0.102mg/ml, το οποίο είναι πολύ χαμηλότερο από τη ζύγιση ακρίβεια 5% σε αυτή τη διαδικασία. Συμπέρασμα Το Malvern ΥΗΣ είναι ιδανικό για DLS μετρήσεις σε μικρά σωματίδια, ακόμη και σε πολύ χαμηλή συγκέντρωση, όπως αποδεικνύεται εδώ. Παρά το χαμηλό ποσοστό καταμέτρηση, το σύνολο του μεγέθους των σωματιδίων από το nm στο καθεστώς μm είναι προσβάσιμες σε ένα και μόνο μέτρηση, η οποία εξασφαλίζει ότι το όργανο μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να μετρήσει το μέγεθος της μονομερούς και οθόνη για αδρανή υλικά. |