Medición de la Talla de la Proteína Usando la Dispersión Luminosa Dinámica, Datos del Surtidor por Malvern

AZoNano - La A a Z de la Nanotecnología: Logotipo de Malven

Temas Revestidos

Antecedentes

Lisozima

Equipo Usado

Preparación y Medición de la Muestra

Resultados

Talla

Confirmación del Resultado Usando la Intensidad el Dispersar

Conclusión

Antecedentes

La Medición pequeña, mal dispersando las moléculas en la solución ha sido siempre un reto para los sistemas dinámicos de la dispersión luminosa. Conseguir la sensibilidad final en el pasado ha requerido un ajuste óptico especializado dedicado a este tipo de medición, o una fuente de laser potente que es impopular debido a su complejidad y costo. Esta nota de aplicación muestra cómo el Malvern HPPS puede alcanzar estas sensibilidades y mantener una amplia gama de aplicaciones.

Lisozima

La Lisozima es una enzima encontrada en rasgones humanos y saliva, y es responsable de matar a las células bacterianas. Fue descubierta por Alexander Fleming en 1922, y se conocía como el primer antibiótico.

Era la primera proteína hacer su estructura determinar, como fue encontrado para ser compacto y casi esférico. Este hecho junto con su disponibilidad tamaño pequeño y fácil toma lisozima una elección excelente para investigar la sensibilidad de un sistema dinámico de la dispersión luminosa.

Equipo Usado

Malvern HPPS.

Lisozima (MERCK), 0,1 almacenadores intermediaros del Sodio-Acetato de la muela (pH 4,25), jeringa plástica disponible, filtro de la jeringa de los 0.2μm, cubeta de cristal cuadrada.

Preparación y Medición de la Muestra

Aunque solamente 15μg de la muestra se requiera para una medición, para permitir a una concentración exacta ser preparado, la Lisozima 100mg fue disuelta en almacenador intermediaro del Sodio-Acetato 1000ml. 0.2ml fue filtrado vía 0,2 filtros de la jeringa del μm en una cubeta de cristal limpia, libre de polvo. Esto constituye una concentración del monómero de la Lisozima de 0.1mg/ml.

La cubeta de cristal fue insertada en la unidad y la temperatura permitidas equilibrar para 3 minutos antes de que una medición 300s fue realizada.

Resultados

Talla

La función de correlación en el diagrama abajo indica que los datos son bastante buenos calcular la talla y la polidispersidad medias de la Lisozima, y una indicación de la distribución dimensional es posible.

Distribución dimensional de Partícula de la muestra de la lisozima.

Cuadro 1. distribución dimensional de Partícula de la muestra de la lisozima.

A Pesar De la concentración inferior, el diámetro del monómero de 4nm fue medido sin obstrucción con la precisión excelente. Además, los agregados, que son extremadamente difíciles de evitar con tales muestras pequeñas y diluídas, eran mensurables también, la contribución en masa de estos agregados fueron medidos para ser menos entonces 0,3%.

Esto indica que es posible medir la talla de 15μg de la Lisozima.

Confirmación del Resultado Usando la Intensidad el Dispersar

La concentración de la muestra de 0,1 mg/ml puede ser confirmada, y por inferencia el resultado validado comparando esta concentración con el valor calculaba de la intensidad el dispersar de la muestra. El índice detectado de la cuenta del fotón de la solución fue medido como 29kcps (Millares de cuentas por segundo). El dispersar del dispersor fue medido como kcps 20,1, que da 8,9 kcps como dispersar debido al monómero de la Lisozima. Podemos calibrar la intensidad el dispersar con un patrón de la Relación De Transformación sabida de Rayleigh, en este caso el tolueno, que dio un índice de la cuenta de 220kcps. Tomando el dn/dc para la Lisozima como 0,2 en una longitud de onda de 632.8nm, y un monómero Mw de 14.400 Dalton, la concentración era calculada para ser 0.102mg/ml, que estaba en conformidad con la exactitud de pesaje del 5% en este procedimiento.

Conclusión

El Malvern HPPS se adapta perfectamente para las mediciones de DLS en pequeñas partículas incluso en la concentración muy inferior, según lo demostrado aquí. A Pesar Del tipo inferior de la cuenta, la gama de tallas completa de la partícula del nanómetro al régimen del μm es accesible en una única medición, que se asegura de que el instrumento se pueda utilizar para medir la talla y la pantalla del monómero para los agregados.

Fuente: “Medición de Proteínas en la Solución en la Concentración Inferior, Monómero de la Lisozima en 0.1mg/mL”, Nota de Aplicación cerca

Para más información sobre esta fuente visite por favor Malvern Instruments Ltd (REINO UNIDO) o los Instrumentos de Malvern (los E.E.U.U.).

Date Added: Apr 14, 2005 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 13. June 2013 01:48

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