Mesure de Capacité Protéique Utilisant la Dispersion de la Lumière Dynamique, Données de Fournisseur de Malvern

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Sujets Couverts

Mouvement Propre

Lysozyme

Matériel Utilisé

Préparation des Échantillons et Mesure

Résultats

Taille

Confirmation du Résultat Utilisant l'Intensité de Dispersion

Conclusion

Mouvement Propre

Le petit de Mesure, dispersant mauvais des molécules en solution a toujours été un défi pour les systèmes dynamiques de dispersion de la lumière. L'Obtention de la sensibilité éventuelle dans le passé a exigé une installation optique spécialisée consacrée à ce type de mesure, ou une source de laser puissante qui est impopulaire à cause de sa complexité et coût. Cette note d'application affiche comment la STATION DE POMPAGE HAUTE PRESSION de Malvern peut atteindre ces sensibilités et mettre à jour un large éventail d'applications.

Lysozyme

Le Lysozyme est une enzyme trouvée en larmes humaines et salive, et est responsable de détruire les cellules bactériennes. Il a été découvert par Alexander Fleming en 1922, et est devenu notoire comme premier antibiotique.

C'était la première protéine pour faire déterminer sa structure, comme s'est avéré compact et presque sphérique. Ce fait avec sa petite taille et disponibilité facile effectue à lysozyme un excellent choix pour vérifier la sensibilité d'un système dynamique de dispersion de la lumière.

Matériel Utilisé

STATION DE POMPAGE HAUTE PRESSION de Malvern.

Lysozyme (MERCK), 0,1 solutions tampon de Sodium-Acétate de molaire (pH 4,25), seringue en plastique jetable, filtre de seringue de 0.2μm, cuvette en verre carrée.

Préparation des Échantillons et Mesure

Bien Que seulement 15μg d'échantillon soit exigé pour une mesure, pour permettre à une concentration précise d'être préparé, le Lysozyme 100mg a été dissous dans la solution tampon du Sodium-Acétate 1000ml. 0.2ml a été filtré par l'intermédiaire des 0,2 filtres de seringue de μm dans une cuvette en verre propre et protégée de la poussière. Ceci constitue une concentration en monomère de Lysozyme de 0.1mg/ml.

La cuvette en verre a été insérée dans l'ensemble et la température permis d'équilibrer pour 3 mn avant qu'une mesure 300s a été exécutée.

Résultats

Taille

Le fonctionnement de corrélation dans le tableau ci-dessous indique que les données sont assez bonnes pour prévoir la taille moyenne et la multidispersion du Lysozyme, et un signe de la distribution de grandeurs est possible.

Distribution de dimension particulaire de l'échantillon de lysozyme.

Le Schéma 1. distribution de dimension particulaire De l'échantillon de lysozyme.

En Dépit de la concentration faible, le diamètre de monomère de 4nm a été de manière dégagée mesuré avec l'excellente précision. De plus, les agrégats, il est extrêmement difficile éviter qu'avec de tels petit et échantillons dilués, étaient mesurables aussi bien, la cotisation de masse de ces agrégats ont été mesurés pour être moins puis 0,3%.

Ceci indique qu'il est faisable de mesurer la taille de 15μg de Lysozyme.

Confirmation du Résultat Utilisant l'Intensité de Dispersion

La concentration en échantillon de 0,1 mg/ml peut être confirmée, et par inférence le résultat validé en comparant cette concentration à la valeur a prévu à partir de l'intensité de dispersion de l'échantillon. Les tarifs trouvés de compte de photon de la solution ont été mesurés comme 29kcps (Milliers de comptes par seconde). La dispersion du dispersant a été mesurée en tant que kcps 20,1, qui donne 8,9 kcps comme dispersion due au monomère de Lysozyme. Nous pouvons étalonner l'intensité de dispersion avec un niveau de Taux connu de Rayleigh, dans ce cas le toluène, qui a donné des tarifs de compte de 220kcps. Prenant le dn/dc pour le Lysozyme en tant que 0,2 à une longueur d'onde de 632.8nm, et un monomère Mw de 14.400 Dalton, la concentration a été prévue pour être 0.102mg/ml, qui était tout à fait en conformité avec l'exactitude de pesage de 5% de cette procédure.

Conclusion

La STATION DE POMPAGE HAUTE PRESSION de Malvern approprié parfaitement aux mesures de DLS sur de petites particules même à la concentration très faible, comme expliqué ici. En Dépit des tarifs faibles de compte, le plein domaine de dimension particulaire du nanomètre au régime de μm est accessible dans une mesure unique, qui s'assure que l'instrument peut être utilisé pour mesurer la taille et l'écran de monomère pour des agrégats.

Source : « Mesure des Protéines en solution à la Concentration Faible, Monomère de Lysozyme à 0.1mg/mL », Note d'Application par

Pour plus d'informations sur cette source visitez s'il vous plaît Malvern Instruments Ltd (R-U) ou les Instruments de Malvern (ETATS-UNIS).

Date Added: Apr 14, 2005 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 13. June 2013 01:22

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