Mesure petits, mal molécules diffusant dans la solution a toujours été un défi pour les systèmes dynamiques de diffusion de lumière. Obtenir la sensibilité ultime dans le passé a besoin d'une optique spécialisé mis en place dédiée à ce type de mesure, ou d'une source laser puissante qui est impopulaire en raison de sa complexité et son coût. Cette note d'application montre comment le Malvern HPPS peut atteindre ces sensibilités et à maintenir un large éventail d'applications. Le lysozyme Le lysozyme est une enzyme présente dans les larmes et la salive humaine, et est responsable de la mort des cellules bactériennes. Il a été découvert par Alexander Fleming en 1922, et devint connu comme le premier antibiotique. Elle a été la première protéine à avoir sa structure déterminée, comme l'a constaté pour être compact et presque sphériques. Ce fait ainsi que sa petite taille et grande disponibilité rend lysozyme un excellent choix pour étudier la sensibilité d'un système de diffusion de lumière dynamique. Équipement d'occasion Malvern HPPS. Le lysozyme (Merck), 0,1 molaire acétate de sodium (pH 4,25), seringue en plastique jetable, filtre seringue 0,2 um, carrés de verre cuvette. Préparation des échantillons et de mesure Bien que seulement 15μg d'échantillon est nécessaire pour une mesure, afin de permettre une concentration précise pour être préparé, 100mg lysozyme a été dissous dans 1000 ml de tampon acétate de sodium. 0,2 ml a été filtré par un filtre de 0,2 um seringue dans un endroit propre, cuvette en verre sans poussière. Ceci constitue une concentration en monomères lysozyme du 0.1mg/ml. La cuvette en verre a été inséré dans l'unité et la température s'équilibrer pendant 3 minutes avant une mesure 300s a été effectuée. Résultats Taille La fonction de corrélation dans le diagramme ci-dessous indique que les données sont assez bons pour calculer la taille moyenne et de polydispersité du lysozyme, et une indication de la distribution de taille est possible.  | Figure 1. Distribution granulométrique de l'échantillon du lysozyme. |
Malgré la faible concentration, le diamètre du monomère 4nm a été clairement mesurée avec une excellente précision. En outre, les agrégats, qui sont extrêmement difficiles à éviter avec ces petits échantillons et diluée, ont été mesurables ainsi, la contribution de masse de ces agrégats a été mesurée à moins de 0,3%. Cela indique qu'il est possible de mesurer la taille de 15μg de lysozyme. La confirmation du résultat en utilisant l'intensité Scattering La concentration de l'échantillon de 0,1 mg / ml peut être confirmé, et par déduction le résultat validé par la comparaison de cette concentration avec la valeur calculée à partir de l'intensité de diffusion de l'échantillon. Le taux de photons détectés compter de la solution a été mesurée comme 29kcps (En milliers de comptes par seconde). La diffusion par le dispersant a été mesurée comme kcps 20,1, ce qui donne 8,9 kcps que la diffusion due au monomère lysozyme. Nous pouvons calibrer l'intensité de diffusion avec un niveau de Rayleigh rapport connu, dans ce cas, le toluène, qui a donné un taux de comptage de 220kcps. Prendre le dn / dc pour le lysozyme de 0,2 à une longueur d'632.8nm, et un monomère de 14 400 Mw Dalton, la concentration a été calculée à 0.102mg/ml, qui était bien dans la précision pesant de 5% dans cette procédure. Conclusion Le Malvern HPPS est parfaitement adapté pour les mesures de DLS sur de petites particules, même à très faible concentration, comme démontré ici. Malgré le taux de faible numération, la gamme complète des particules de taille de la nm au régime um est accessible en une seule mesure, ce qui garantit que l'instrument peut être utilisé pour mesurer la taille d'écran de monomères et d'agrégats. |