동적인 가벼운 뿌리기 의 Malvern의 공급자 데이터를 사용하는 단백질 규모의 측정

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커버되는 토픽

배경

라이소자임

사용되는 장비

견본 준비와 측정

결과

규모

뿌리기 강렬을 사용하는 결과의 확인

결론

배경

작은 측정은, 부족하게 해결책에 있는 분자를 뿌려서 지금까지 항상 동적인 가벼운 뿌리는 시스템을 위한 도전이었습니다. 과거에는 궁극적인 감도를 얻는 것은 측정의 이 모형에 전념한 전문화한 광학적인 준비를, 또는 그것의 복합성 및 비용 때문에 인기가 없는 강력한 레이저 소스를 요구했습니다. 이 응용 주는 Malvern HPPS가 어떻게 이 감도를 도달하고 넓은 채용 범위를 유지할 수 있는지 보여줍니다.

라이소자임

라이소자임은 인간 눈물과 침에서 찾아낸 효소이고, 세균성 세포를 죽이기에 책임 있습니다. 그것은 1922년에 알렉산더 플레밍에 의해 발견되고, 첫번째 항생제로 알려졌습니다.

조밀하고 거의 둥글기 위하여 찾아냈다 것과 같이, 첫번째 단백질 그것의 구조물을 결정해 달라고 하기위하여이었습니다. 그것의 소형과 쉬운 가용성과 더불어 이 사실은 라이소자임에게 동적인 가벼운 뿌리는 시스템의 감도 조사를 위한 우수한 선택합니다.

사용되는 장비

Malvern HPPS.

라이소자임 (MERCK), 0.1 어금니 나트륨 아세테이트 버퍼 (PH 4.25), 처분할 수 있는 플라스틱 주사통, 0.2μm 주사통 필터, 정연한 유리제 큐벳.

견본 준비와 측정

견본의 단지 15μg가 측정을 위해 요구되더라도, 정확한 사격량을 준비되는 가능하게 하도록, 100mg 라이소자임은 1000ml 나트륨 아세테이트 버퍼에서 녹았습니다. 0.2ml는 청결한, 먼지가 없는 유리제 큐벳으로 0.2 μm 주사통 필터를 통해 필터되었습니다. 이것은 0.1mg/ml의 라이소자임 단위체 농도를 만들어 냅니다.

유리제 큐벳은을 위해 평형시키는 것을 허용된 부대 및 온도로 3 분 300s 측정이 실행되기 전에 삽입되었습니다.

결과

규모

도표에 있는 상관 함수는 아래에 데이터가 라이소자임의 비열한 규모 그리고 polydispersity를 산출하게 충분히 좋다는 것을 표시합니다, 크기 분포의 표시는 가능합니다.

라이소자임 견본의 입자 크기 배급.

숫자 1. 라이소자임 견본의 입자 크기 배급.

낮은 사격량에도 불구하고, 4nm의 단위체 직경은 우수한 정밀도로 명확하게 측정되었습니다. 추가적으로, 그 같은 작고 묽게 한 견본으로 피하기 극단적으로 어려운, 골재는 더 적은 그 후에이기 위하여 또한, 이 골재의 대량 기여금 측정되었습니다 0.3%.

이것은 그것이 라이소자임의 15μg의 규모를 측정하는 것은 가능하다는 것을 표시합니다.

뿌리기 강렬을 사용하는 결과의 확인

0.1 mg/ml의 견본 사격량은 확인될 수 있고, 추론에 의하여 가치와 이 사격량을 비교해서 유효하게 한 결과는 견본의 뿌리 강렬에서 산출했습니다. 해결책의 검출된 광양자 조사 비율은 29kcps (초당 조사의 수천)로 측정되었습니다. 라이소자임 단위체 때문에 뿌리기로 8.9 kcps를 주는 dispersant에서 뿌리는 것은 20.1 kcps로 측정되었습니다. 우리는 Rayleigh 알려진 비율, 이 경우에는 220kcps의 조사 비율을 준 툴루엔의 기준을 가진 뿌리 강렬을 측정해서 좋습니다. 라이소자임을 위한 dn/dc, 및 14,400 돌턴의 단위체 MW를 632.8nm의 파장에 0.2로 취해서, 사격량은 이 절차에서 5%의 무게를 다는 정확도 충분히 인 0.102mg/ml이기 위하여 산출되었습니다.

결론

Malvern HPPS는 여기에서 설명되는 것과 같이 아주 낮은 사격량에 조차 소립자에 DLS 측정을 위해 완벽하게 적응됩니다. 낮은 조사 비율에도 불구하고, nm에서 μm 정권에 가득 차있는 입자 크기 범위는 골재를 위한 단위체 규모 그리고 경계진을 측정하기 위하여 계기는 사용될 수 있다는 것을 확인하는 단 하나 측정에서 접근 가능합니다.

근원: "낮은 사격량에 해결책, 0.1mg/mL에 라이소자임 단위체에 있는 단백질의 측정", 응용 주

이 근원에 추가 정보를 위해 Malvern 계기 주식 회사 (UK) 또는 Malvern 계기 (미국)를 방문하십시오.

Date Added: Apr 14, 2005 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 13. June 2013 01:33

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