Meting van EiwitGrootte die het Dynamische Lichte Verspreiden, de Gegevens van de Leverancier door Malvern Gebruiken zich

AZoNano - A aan Z van Nanotechnologie: Het Embleem van Malven

Besproken Onderwerpen

Achtergrond

Lypozyme

Gebruikte Apparatuur

De Voorbereiding en de Meting van de Steekproef

Resultaten

Grootte

Bevestiging Van het Resultaat die de Verspreidende Intensiteit Gebruiken

Conclusie

Achtergrond

Het Meten van kleine, slecht verspreidende molecules in oplossing is altijd een uitdaging voor dynamische het lichte verspreiden zich systemen geweest. Het Krijgen van de uiteindelijke gevoeligheid in het verleden heeft een gespecialiseerde optische opstelling gewijd aan dit type van meting, of een krachtige laserbron vereist die wegens zijn ingewikkeldheid en kosten impopulair is. Deze toepassingsnota toont aan hoe Malvern HPPS deze gevoeligheden kan bereiken en een brede waaier van toepassingen handhaven.

Lypozyme

Het Lypozyme is een enzym in menselijke scheuren en speeksel wordt gevonden, en is de oorzaak van het doden van bacteriële cellen die. Het werd ontdekt door Alexander Fleming in 1922, en werd genoemd geworden eerste antibioticum.

Het was de eerste proteïne om zijn bepaalde structuur te hebben, zoals om compact en bijna sferisch werd gevonden te zijn. Dit feit samen met zijn kleine grootte en gemakkelijke beschikbaarheid maakt tot lypozyme een uitstekende keus voor het onderzoeken van de gevoeligheid van een dynamisch het lichte verspreiden zich systeem.

Gebruikte Apparatuur

Malvern HPPS.

Lypozyme (MERCK), 0.1 maal natrium-Acetaat buffer (pH 4.25), beschikbare plastic spuit, 0.2μm spuitfilter, vierkante glascuvette.

De Voorbereiding en de Meting van de Steekproef

Hoewel slechts 15μg van steekproef voor een meting wordt vereist, om een nauwkeurige concentratie toe te laten om worden voorbereid, werd het Lypozyme 100mg opgelost in natrium-Acetaat 1000ml buffer. 0.2ml werd gefiltreerd via een 0.2 μm spuitfilter in een schone, stofvrije glascuvette. Dit vormt een het monomeerconcentratie van het Lypozyme van 0.1mg/ml.

De glascuvette werd opgenomen in de eenheid en de temperatuur stond om 3 minuten in evenwicht te brengen toe alvorens een 300s meting werd uitgevoerd.

Resultaten

Grootte

De correlatiefunctie in het diagram wijst hieronder erop dat de gegevens goed genoeg zijn om de gemiddelde grootte en polydispersity van het Lypozyme te berekenen, en een aanwijzing van de groottedistributie is mogelijk.

De groottedistributie van het Deeltje van de lypozymesteekproef.

Figuur 1. De groottedistributie van het Deeltje van de lypozymesteekproef.

Ondanks de lage concentratie, werd de monomeerdiameter van 4nm duidelijk gemeten met uitstekende precisie. Bovendien de complexen, die uiterst moeilijk om met dergelijke kleine en verdunde steekproeven zijn te vermijden, waren eveneens meetbaar, werd de massabijdrage van deze complexen gemeten om minder toen 0.3% te zijn.

Dit wijst erop dat het haalbaar is om de grootte van 15μg van Lypozyme te meten.

Bevestiging Van het Resultaat die de Verspreidende Intensiteit Gebruiken

De steekproefconcentratie van 0.1 die mg/ml kan, en door gevolgtrekking worden bevestigd het resultaat door deze die concentratie met de waarde wordt bevestigd te vergelijken vanaf de verspreidende intensiteit van de steekproef wordt berekend. Het ontdekte tarief van de fotontelling van de oplossing werd gemeten als 29kcps (Duizenden tellingen per seconde). Het verspreiden zich van de verspreider werd gemeten als 20.1 kcps, die 8.9 kcps als zich verspreiden wegens het monomeer van het Lypozyme geeft. Wij kunnen de verspreidende intensiteit met een norm van bekende Rayleigh Verhouding, in dit geval tolueen kalibreren, dat een tellingstarief van 220kcps gaf. Nemend dn/dc voor Lypozyme als 0.2 bij een golflengte van 632.8nm, en een monomeer Mw van 14.400 Dalton, werd de concentratie berekend om 0.102mg/ml te zijn, die goed binnen de het wegen nauwkeurigheid van 5% in deze procedure was.

Conclusie

Malvern HPPS is volkomen geschikt voor metingen DLS op kleine deeltjes zelfs bij zeer lage concentratie, zoals hier aangetoond. Ondanks het lage tellingstarief, is de volledige waaier van de deeltjesgrootte van NM aan het regime μm toegankelijk in één enkele meting, die ervoor zorgt dat het instrument kan worden gebruikt om de het monomeergrootte en scherm voor complexen te meten.

Bron: „Meting van Proteïnen in Oplossing bij Lage Concentratie, het Monomeer van het Lypozyme bij 0.1mg/mL“, de Nota van de Toepassing langs

Voor meer informatie over deze bron te bezoeken gelieve Instrumenten Malvern Instruments Ltd (het UK) of Malvern (de V.S.).

Date Added: Apr 14, 2005 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 13. June 2013 01:18

Ask A Question

Do you have a question you'd like to ask regarding this article?

Leave your feedback
Submit