Измерение Размера Протеина Используя Динамический Светлый Разбрасывать, Данные По Поставщика Malvern

AZoNano - A к Z Нанотехнологии: Логос Malven

Покрытые Темы

Предпосылка

Лизозим

Используемое Оборудование

Подготовка и Измерение Образца

Результаты

Размер

Подтверждение Результата Используя Интенсивность Разбрасывать

Заключение

Предпосылка

Измерять малый, бедно разбрасывающ молекулы в разрешении всегда возможность для динамических светлых разбрасывая систем. Получать типичную чувствительность в прошлом требовал специализированного оптически настроения предназначенного к этому типу измерения, или мощного источника лазера который непопулярен из-за своих сложности и цены. Это на примечание по применению показано как Malvern HPPS может достигнуть эти чувствительности и поддержать широкий диапазон применений.

Лизозим

Лизозим энзим найденный в людских разрывах и слюне, и ответствен для убивать бактериальные клетки. Было открыно Александром Fleming в 1922, и стало известным как первый антибиотик.

Это было первым протеином иметь свою структуру быть определенным, как нашл, что быть компактн и почти сферически. Этот факт вместе с своими малым размером и легким наличием делает лизозимом превосходный выбор для расследовать чувствительность динамической светлой разбрасывая системы.

Используемое Оборудование

Malvern HPPS.

Лизозим (MERCK), 0,1 буфера Натри-Ацетата моляра (пэ-аш 4,25), устранимый пластичный шприц, фильтр шприца 0.2μm, квадратная стеклянная кюветка.

Подготовка и Измерение Образца

Хотя только 15μg образца необходимо для измерения, для того чтобы позволить точная концентрация быть подготовленным, Лизозим 100mg был растворен в буфере Натри-Ацетата 1000ml. 0.2ml было фильтровано через 0,2 фильтра в чистое, пыль шприца μm - свободную стеклянную кюветку. Это образовывает концентрацию мономера Лизозима 0.1mg/ml.

Стеклянная кюветка была введена в блок и температуру позволенные эквилибрировать для 3 минуты прежде чем измерение 300s было выполнено.

Результаты

Размер

Функция корреляции в диаграмме ниже показывает что данные хороши достаточно для того чтобы высчитать средние размер и polydispersity Лизозима, и индикация распределения по размеру возможна.

Распределение по размеру Частицы образца лизозима.

Диаграмма 1. распределение по размеру Частицы образца лизозима.

Несмотря На низкую концентрацию, диаметр мономера 4nm ясно был измерен с превосходной точностью. В добавлении, компоситы, которые весьма трудны для того чтобы во избежание с такими малыми и разбавленными образцами, были измеряемый также, массовый вклад этих компоситов были измерены для того чтобы быть после этого 0,3%.

Это показывает что оно возможно измерить размер 15μg Лизозима.

Подтверждение Результата Используя Интенсивность Разбрасывать

Концентрацию образца 0,1 mg/ml можно подтвердить, и подразумеваемым результат утверженный путем сравнивать эту концентрацию с значением высчитал от интенсивности разбрасывать образца. Обнаруженный тариф отсчета фотона разрешения был измерен как 29kcps (Тысячи отсчетов в секунду). Разбрасывать от dispersant было измерен как kcps 20,1, который дает 8,9 kcps как разбрасывать должный к мономеру Лизозима. Мы можем откалибрировать интенсивность разбрасывать с стандартом известного Коэффициента Rayleigh, в этом толуоле случая, который дал тариф отсчета 220kcps. Принимающ dn/dc для Лизозима как 0,2 на длине волны 632.8nm, и мономер Mw 14.400 Dalton, была высчитаны, что было концентрация 0.102mg/ml, которое было в пределах веся точности 5% в этой процедуре.

Заключение

Malvern HPPS совершенно одето для измерений DLS на малых частицах даже на очень низкой концентрации, как продемонстрировано здесь. Несмотря На низкий тариф отсчета, полный ряд размера частицы от nm к режиму μm доступн в одиночном измерении, которое обеспечивает что аппаратуру можно использовать для того чтобы измерить размер и экран мономера для компоситов.

Источник: «Измерение Протеинов в Разрешении на Низкой Концентрации, Мономере Лизозима на 0.1mg/mL», Примечание по Применению мимо

Для больше информации на этом источнике пожалуйста посетите Аппаратуры Ltd Malvern (ВЕЛИКОБРИТАНИЮ) или Аппаратуры Malvern (США).

Date Added: Apr 14, 2005 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 13. June 2013 01:45

Ask A Question

Do you have a question you'd like to ask regarding this article?

Leave your feedback
Submit