Mätningen av Protein Storleksanpassar genom Att Använda den Dynamiska Ljusa Spridningen, LeverantörData vid Malvern

AZoNano - Aet till Z av Nanotechnology: Malven Logo

Täckte Ämnen

Bakgrund

Lysozyme

Använd Utrustning

Ta Prov Förberedelsen och Mätningen

Resultat

Storleksanpassa

Bekräftelse Av Resultatet genom Att Använda SpridningStyrkan

Avslutning

Bakgrund

att Mäta som är litet, dåligt spridningmolekylar i lösning, har alltid varit en utmaning för dynamiska ljusa spridningsystem. När Du Får den ultimat känsligheten i förflutnan har krävt ett specialiserat optiskt ställer in hängivet till denna typ av mätningen eller en kraftig laser-källa, som är impopulär på grund av dess komplexitet, och kostar. Denna applikation noterar shows hur Malvernen HPPS kan ne dessa känsligheter och underhålla en lång räcka av applikationer.

Lysozyme

Lysozyme är ett enzym som finnas i människarevor och saliva och är ansvariga för att döda bakterie- celler. Den upptäcktes av Alexander Fleming i 1922 och blev bekant som den första antibiotikummen.

Det var det första dess proteinet att ha att strukturera beslutsamt, som fanns för att vara kompakt och nästan sfäriskt. Detta faktum tillsammans med dess litet storleksanpassar, och lätt tillgänglighet gör lysozyme ett utmärkt primat för att utforska känsligheten av ett dynamiskt ljust spridningsystem.

Använd Utrustning

Malvern HPPS.

Lysozyme (MERCK), 0,1 kindtandNatrium-Acetate fungera som buffert (pH 4,25), disponibel plast- injektionsspruta, 0.2μm som injektionssprutan filtrerar, kvadrerar den glass cuvetten.

Ta Prov Förberedelsen och Mätningen

Även Om endast 15μg av tar prov krävs för en mätning, för att möjliggöra en exakt koncentration för att vara förberedda, Lysozyme 100mg upplöstes i Natrium-Acetate 1000ml fungera som buffert. 0.2ml filtrerades via en 0,2 μminjektionsspruta filtrerar in i en rengöring, dammar av - den fria glass cuvetten. Detta utgör en Lysozymemonomerkoncentration av 0.1mg/ml.

Den glass cuvetten sattes in in i enheten, och den tillåtna temperaturen att hålla i jämvikt för 3 noterar, för en mätning 300s utfördes.

Resultat

Storleksanpassa

Korrelationen fungerar i det nedanföra diagrammet indikerar, att datan är bra nog att beräkna medlet storleksanpassar och polydispersity av Lysozymen, och en indikering av storleksanpassafördelningen är möjligheten.

Partikeln storleksanpassar fördelning av lysozymen tar prov.

Figurera 1. Partikeln storleksanpassar fördelning av lysozymen tar prov.

Illviljan den låga koncentrationen, monomerdiametern av 4nm mättes klart med utmärkt precision. I tillägg var aggregaten, som är extremt svåra att undvika med sådan litet, och utspätt tar prov, mätbara som väl, samlasbidraget av dessa aggregat mättes för att vara mindre därefter 0,3%.

Detta indikerar att den är görlig att mäta storleksanpassa av 15μg av Lysozyme.

Bekräftelse Av Resultatet genom Att Använda SpridningStyrkan

Ta provkoncentrationen av 0,1 mg/ml kan bekräftas, och vid slutsats beräknade resultatet som validerades, genom att jämföra denna koncentration med värdera, från spridningstyrkan av ta prov. Den avkända fotonräkningen klassar av lösningen mättes som 29kcps (Tusentals räkningar per understöder). Spridningen från dispersanten mättes som kcps 20,1, som ger 8,9 kcps som spridningen tack vare Lysozymemonomeren. Vi kan kalibrera spridningstyrkan med ett standart av det bekant Rayleigh Förhållandet, i denna falltoluene, som gav en räkning klassar av 220kcps. Ta dnen/dc för Lysozyme som 0,2 på en våglängd av 632.8nm och en monomer Mw av 14.400 Dalton, beräknades koncentrationen för att vara 0.102mg/ml, som var väl inom den vägande exaktheten av 5% i detta tillvägagångssätt.

Avslutning

Malvernen HPPS passas perfekt för DLS-mätningar på lilla partiklar även på mycket låg koncentration, som visat här. Illvilja som den låga räkningen klassar, storleksanpassar den fulla partikeln spänner från nmen till μmstyret är tillgänglig i en singelmätning, som ser till att instrumentera kan vara van vid mäter monomeren storleksanpassar och avskärmer för aggregat.

Källa: ”Noterar Mätningen av Proteiner i Lösningen på Låg Koncentration, LysozymeMonomer på 0.1mg/mL”, Applikationen by

För mer information på denna källa behaga besök Malvern Instrumenterar AB (UK), eller Malvern Instrumenterar (USA).

Date Added: Apr 14, 2005 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 13. June 2013 01:51

Ask A Question

Do you have a question you'd like to ask regarding this article?

Leave your feedback
Submit