蛋白質範圍的評定使用動態光散射,供應商數據的由 Malvern

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包括的事宜

背景

溶菌酶

使用的設備

範例準備和評定

結果

範圍

結果的確認使用分散強度的

結論

背景

評定小,拙劣地分散在解決方法的分子總是動態光散射系統的一個挑戰。 獲得最終區分從前要求了一個專門化的光學設置投入此種評定或者是不得人心的由於其複雜和費用的一個強大的激光源。 此應用註解顯示 Malvern HPPS 如何可能到達這些區分和維護各種各樣的應用。

溶菌酶

溶菌酶是在人的眼淚和唾液找到的酵素,并且對殺害細菌細胞負責。 亞歷山大 Fleming 發現在 1922年它,并且出名作為第一抗生素。

它是第一蛋白質安排其結構被確定,像發現緊湊和接近球狀的。 以及其小型和容易的可用性的此情況做出溶菌酶調查的一個動態光散射系統的區分一個非常好的選擇。

使用的設備

Malvern HPPS。

溶菌酶 (默克), 0.1 槽牙鈉醋酸鹽緩衝 (酸碱度 4.25),一次性塑料注射器, 0.2μm 注射器補白,方形玻璃小試管。

範例準備和評定

雖然範例仅 15μg 對於評定是必需的,使準確濃度準備, 100mg 溶菌酶在 1000ml 鈉醋酸鹽緩衝被溶化。 0.2ml 通過 0.2 μm 注射器補白被過濾了到一支乾淨,無灰塵的玻璃小試管。 這構成 0.1mg/ml 的溶菌酶單體含量。

3 分鐘,在 300s 評定進行了前,玻璃小試管被插入了到允許的這個部件和這個溫度平均為。

結果

範圍

在下面的繪製的相關函數表明這個數據是足够好計算溶菌酶的平均範圍和多分散性,并且大小分佈的表示是可能的。

溶菌酶範例的粒度分佈。

圖 1. 溶菌酶範例的粒度分佈。

儘管低濃度, 4nm 單體直徑明顯地評定了與非常好的精確度。 另外,綜合,是非常難避免與這樣小和稀釋範例,是可測量的,這些綜合的質量攤繳被評定是較少然後 0.3%。

這表明是可行的評定溶菌酶 15μg 的範圍。

結果的確認使用分散強度的

0.1 mg/ml 的範例濃度可以被確認,并且由推斷驗證的這個結果此濃度與這個值比較從這個範例的分散強度計算了。 這個解決方法的檢測光子計數費率被評定了作為 29kcps (千位計數每秒)。 分散從分散劑被評定了作為 20.1 kcps,產生 8.9 kcps 作為分散由於溶菌酶單體。 我們可以校準與已知的 Rayleigh 比例,在這種情況下甲苯標準的分散強度,產生 220kcps 的計數費率。 採取溶菌酶的 dn/dc 作為 0.2 在 632.8nm 波長和單體兆瓦 14,400 多爾頓,濃度被計算是 0.102mg/ml,是在稱的準確性的 5% 內在此程序。

結論

Malvern HPPS 完全適用與在小顆粒的 DLS 評定甚而以非常低濃度,如被展示這裡。 儘管低計數費率,從 nm 的充分的顆粒大小範圍到μm 政權是可訪問的在一個唯一評定,保證儀器可以用於評定單體範圍和屏幕綜合的。

來源: 「蛋白質的評定在解決方法以低濃度,在 0.1mg/mL 的溶菌酶單體的」,應用註解

關於此來源的更多信息请請參觀 Malvern 有限公司 (英國) 儀器Malvern 儀器 (美國)

Date Added: Apr 14, 2005 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 13. June 2013 01:15

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