Behandelte Themen
Hintergrund
Antigenen und Antikörpern
Dynamic Light Scattering für Messung von Partikelgrößen
Der Umgang mit kleinen Teilchen und verdünnten Konzentrationen
Case Study - Wechselwirkungen zwischen Antikörpern und einem Virus
Versuchsdurchführung
Ergebnisse
Schlussfolgerungen
Hintergrund
Antigenen und Antikörpern
Antikörper (Ab) sind Proteine, die vom Körper als Reaktion auf die Anwesenheit eines fremden Körper produziert wird. Antigene (Ag) sind ausländische Verbindungen, die die Produktion von Antikörpern anregen. Sie können frei in Lösung, oder sie können auf der Oberfläche von Zellen oder Partikel wie Viren oder Bakterien gebunden zu sein. Ein Antikörper als Reaktion auf einen Fremdkörper reagiert mit dem Antigen an einen Immunkomplex (Ab-Ag)-Form und ist somit inaktiviert.
Dynamic Light Scattering für Messung von Partikelgrößen
Die dynamische Lichtstreuung (Photonen-Korrelations-Spektroskopie) ist eine Technik, die Größe der Teilchen messen können bis zu 1nm Durchmesser. Partikel in der Suspension zu unterziehen zufällige Brownsche Bewegung. Wenn diese Partikel mit einem Laserstrahl beleuchtet werden, schwankt die Intensität des gestreuten Lichts mit einer Geschwindigkeit, abhängig von der Größe der Partikel ist. Die Analyse dieser Intensitätsschwankungen liefert die Geschwindigkeit der Brownschen Bewegung und damit die Partikelgröße.
Der Umgang mit kleinen Teilchen und verdünnten Konzentrationen
Die Intensität des gestreuten Lichts von kleinen Partikeln oder aus Proben, die sehr verdünnte erhalten wird nicht ausreichen für wiederholbare PCS Sizing-Messungen mit einem Standard 10mW He-Ne-Laser.
Eine Methode zur Überwindung solcher Probleme ist es, eine höhere Effizienz Detektor verwenden. Der Malvern Zetasizer HS Instrument enthält eine Avalanche-Fotodiode (APD).
Dieser Detektor ermöglicht die Messung von kleinen Partikeln und Proben mit niedriger Konzentration ohne die Notwendigkeit für einen stärkeren Laser.
Case Study - Wechselwirkungen zwischen Antikörpern und einem Virus
Diese Application Note beschreibt die dynamische Lichtstreuung Messungen, bei denen die Affinität von zwei verschiedenen Antikörpern für eine Virus-Probe untersucht werden können.
Versuchsdurchführung
Die Messungen wurden auf einem aus Malvern Zetasizer 3000HS bei einer Temperatur von 25 ° C. Das gestreute Licht wurde in einem Winkel von 90 ° festgestellt.
Ergebnisse
Abbildung 1 zeigt die Intensität Größenverteilungen von 3 Wiederholungsmessungen einer Probe von Serum mit Antikörpern erhalten. Die Verteilungen wurden aus der Analyse der Daten mit den CONTIN Algorithmus erhalten. Die Distributionen sind monomodale mit Peak-Modi bei 32nm bzw.. Die Affinität von zwei verschiedenen Antikörpern für einen Virus wurde durch Mischen von jedem der Antikörper-Proben mit einer Probe des Virus und zügig Sizing-Messungen (alle 30 Sekunden) bestimmt. Abbildung 2 zeigt die z-mittlere Durchmesser (der mittlere Durchmesser von der Intensität des gestreuten Lichts basiert) für die Mischungen aus 2-Antikörper mit Viruspartikeln in Abhängigkeit von der verstrichenen Zeit nach dem Mischen erhalten. Der Anstieg in der z-mittlere Durchmesser ergibt sich aus der Bildung der Antikörper-Virus-Komplex. Antikörper 1 zeigt eine höhere Affinität für das Virus durch die steilere Steigung der Kurve angezeigt.
Abbildung 1. Intensity Größenverteilungen von 3 Wiederholungsmessungen einer Probe von Serum mit Antikörpern erhalten.
Abbildung 2. Eine Darstellung der z-mittlere Durchmesser von Mischungen aus 2 verschiedenen Antikörpern mit einem Virus als Funktion der verstrichenen Zeit nach dem Mischen.
Schlussfolgerungen
Photonen-Korrelations-Spektroskopie lässt sich die Größe von kleinen Partikeln zu messen. Es ist eine non-invasive Technik, die verwendet werden, um die Affinität der verschiedenen Antikörpern für ein bestimmtes Virus beurteilen können.
Quelle: The Study of Antikörper: Antigen-Wechselwirkungen mittels Lichtstreuung Techniques ", Application Note von Malvern Instruments.
Für weitere Informationen über diese Quelle besuchen Sie bitte Malvern Instruments Ltd (UK) oder Malvern Instruments (USA) .