Caracterización de los Liposomas Incluyendo La Talla y la Caracterización Potencial de la Zeta de Liposomas Aniónicos y Catiónicos Usando el Zetasizer Nano De los Instrumentos de Malvern

Temas Revestidos

Antecedentes
     Propiedades que Efectúan el Destino de Liposomas Intravenoso Inyectados
     Potencial de Medición de la Zeta de Liposomas
Experimental
     Preparación del Liposoma
     Caracterización del Liposoma
Resultados
     Liposomas Aniónicos
     Liposomas Catiónicos
Conclusiones

Antecedentes

Los Liposomas son vesículas integradas por un bilayer de las moléculas del lípido que incluyen un volumen acuoso. Los utilizaron inicialmente como sistemas modelo para estudiar propiedades de la membrana tales como permeabilidad. Las aplicaciones Recientes han concentrado en su uso como vehículos de salida de la droga debido a la capacidad de incorporar los materiales solubles en agua en su volumen acuoso o los materiales solubles en el aceite en el bilayer del lípido. Los Liposomas se pueden diseñar para las aplicaciones específicas con el mando de la composición de lípido o la modificación de la superficie por la conjugación de anticuerpos o de péptidos. Por ejemplo, los liposomas catiónicos se utilizan en las aplicaciones de la terapia génica debido a su capacidad al complejo a la DNA.

Propiedades que Efectúan el Destino de Liposomas Intravenoso Inyectados

El destino de liposomas intravenoso inyectados es determinado por varias propiedades. Dos del más importante son talla de partícula y potencial de la zeta. Ambos parámetros se pueden medir en el rango Nano de Zetasizer de instrumentos. La talla de Partícula se mide usando la dispersión luminosa dinámica (DLS). Esta técnica mide las fluctuaciones dependientes del tiempo en la intensidad de la luz dispersa que ocurren porque las partículas están experimentando el movimiento Browniano. El Análisis de estas fluctuaciones de la intensidad activa la determinación de los coeficientes de difusión de las partículas que se convierten en una distribución dimensional.

Potencial de Medición de la Zeta de Liposomas

El potencial de la zeta de una partícula es la carga total que la partícula detecta en un media determinado. El Conocimiento del potencial de la zeta de una preparación del liposoma puede ayudar a predecir el destino de los liposomas in vivo. La Medición del potencial de la zeta de muestras en el Zetasizer Nano se hace usando la técnica del laser Doppler velocimetry. En esta técnica, un voltaje es aplicado a través de un par de electrodos en cualquier final de un con células la dispersión de la partícula. Las partículas Cargadas se atraen al electrodo opuesto cargado y su velocidad se mide y se expresa en fuerza de campo de la unidad como su movilidad electroforética. La información Adicional sobre estas técnicas se puede encontrar en otra aplicación y notas técnicas sobre el Web site de los Instrumentos de Malvern.

Esta nota de aplicación resume las mediciones potenciales de la talla y de la zeta hechas en los liposomas aniónicos y catiónicos.

Experimental

Preparación del Liposoma

Los Liposomas fueron preparados por el método de la sonicación. Una serie de liposomas aniónicos fue preparada de diversas mezclas del dipalmitoylphosphatidylcholine (DPPC) y el dipalmitoylphosphatidylglycerol en salino protegida fosfato (PBS) como se detalla en los liposomas Catiónicos del cuadro 1. fue preparado de DPPC, del colesterol y del bromuro dimethyl del dioctadecylammonium del tensioactivador catiónico (DDAB) según lo resumido en el cuadro 2. En todos los casos las concentraciones finales de los liposomas eran 4mg lipid/ml PBS.

El Cuadro 1. Pesos de DPPC y de DPPG usados en la preparación de una serie de liposomas aniónicos en fosfato protegió salino (PBS)

DPPC (magnesio)

DPPG (magnesio)

DPPG (espolón %)

PBS (ml)

19

1

5,2

5

18

2

10,9

5

17

3

17,4

5

16

4

24,6

5

15

5

32,8

5

El Cuadro 2. Pesos de DPPC, de colesterol y de DDAB usados en la preparación de una serie de liposomas catiónicos en fosfato protegió salino (PBS).

DPPC (magnesio)

Colesterol (magnesio)

DDAB (magnesio)

DDAB (espolón %)

PBS (ml)

17

2

1

5,6

5

16

2

2

11,8

5

15

2

3

18,6

5

14

2

4

26,1

5

13

2

5

34,6

5

Los lípidos fueron disueltos y mezclados en cloroformo (DPPG fue disuelto en una mezcla del cloroformo/del metanol (2:1 v/v)) y del disolvente quitado por la evaporación rotativa en 60°C para obtener una película fina del lípido. El volumen apropiado de fosfato protegió salino (precalentamiento en 60°C) fue agregado y el vaso fue agitado vigoroso en un mezclador rotativo para producir las vesículas multilamellar (MLVs). El MLVs era entonces baño sonorizado en 60°C por 15 minutos para producir los liposomas unilamellar. Después de la sonicación, las muestras del liposoma fueron incubadas en 60°C por 15 minutos para permitir que destemplen.

Caracterización del Liposoma

Todas Las mediciones potenciales del apresto y de la zeta fueron hechas en un Zetasizer que ZS Nanos en las mediciones del Apresto 25°C. fueron hechos en las muestras aseadas del liposoma, mientras que las muestras fueron diluidas 1 en 10 con PBS para las mediciones del potencial de la zeta. El ZS Nano incorpora las ópticas no invasores del retrodifusor (NIBS™) para las mediciones de clasificación. El ángulo de la detección de las mediciones de la talla 173°enables de las muestras concentradas, turbias que se harán. Sin Embargo, la luz dispersa detectada de muestras durante una medición potencial de la zeta se hace al ángulo delantero de 12°. Por Lo Tanto las necesidades de rayo láser de penetrar la muestra y por consiguiente, la concentración de la muestra para las mediciones potenciales de la zeta deben ser más inferiores que ésa para clasificar.

Resultados

Liposomas Aniónicos

Los resultados del apresto de la partícula y las mediciones potenciales de la zeta de los diversos liposomas aniónicos se resumen en el cuadro 3. Este vector muestra los diámetros z-medios (los diámetros medios basados sobre la intensidad de la luz dispersa), el índice de la polidispersidad (un presupuesto del ancho de la distribución) y los valores potenciales de la zeta media obtenidos para las diversas muestras del liposoma. Los valores z-medios del diámetro son los medios de 3 mediciones de la repetición (desviaciones estándar en corchetes) hechas en las muestras aseadas del liposoma. Los valores potenciales de la zeta son los medios de 5 mediciones de la repetición (desviaciones estándar en corchetes) hechas en las muestras diluidas (1 en 10 con PBS).

Cuadro 3. Los diámetros z-medios en el nanómetro, los valores de índice de la polidispersidad y los potenciales de la zeta en el milivoltio de diversos liposomas aniónicos se prepararon en PBS. Los valores de la desviación estándar de las mediciones de la repetición se muestran en corchetes.

% del Espolón DPPG

Diámetro z-Sistema avoirdupois en el nanómetro (SD)

Polidispersidad (SD)

Potencial de la Zeta en el milivoltio (SD)

5,2

133,8 (0,4)

0,292 (0,01)

-9,0 (0,64)

10,9

92,3 (0,49)

0,269 (0,01)

-15,7 (1,36)

17,4

107,2 (0,20)

0,256 (0,01)

-22,5 (0,95)

24,6

125,1 (0,60)

0,261 (0,01)

-27,3 (1,29)

32,8

89,2 (1,39)

0,264 (0,01)

-31,4 (0,98)

Los resultados del apresto obtenidos para la demostración aniónica de estas preparaciones del liposoma que el método de la sonicación del baño de preparación da medios de la talla y anchos similares de la distribución.

Los valores del potencial y de la talla de la zeta se trazan en el cuadro 1 en función del mole% DPPG. Los datos muestran que las mediciones son muy repetibles para cada muestra del liposoma y muestran la tendencia prevista de convertirse más negativo - cargado con el aumento de contenido de DPPG. Además, los resultados muestran que la talla es independiente de la composición del liposoma.

Cuadro 1. valores del potencial y de la talla de la Zeta obtenidos en función del contenido del mole% DPPG para una serie de liposomas aniónicos.

Liposomas Catiónicos

El Cuadro 4 resume los resultados potenciales del apresto y de la zeta obtenidos para la serie de liposomas catiónicos. Las distribuciones dimensionales Similares fueron obtenidas compararon a las preparaciones aniónicas del liposoma. El Cuadro 2 muestra un gráfico de los resultados del potencial y de la talla de la zeta obtenidos en función del mole% DDAB y muestra un aumento gradual en carga positiva mientras que el contenido de DDAB de los liposomas aumenta.

Cuadro 4. Los diámetros z-medios en el nanómetro, los valores de índice de la polidispersidad y los potenciales de la zeta en el milivoltio de diversos liposomas catiónicos se prepararon en PBS. Los valores de la desviación estándar de las mediciones de la repetición se muestran en corchetes.

% del Espolón DDAB

Diámetro z-Sistema avoirdupois en el nanómetro (SD)

Polidispersidad (SD)

Potencial de la Zeta en el milivoltio (SD)

5,6

116,6 (1,0)

0,258 (0,01)

10,3 (0,88)

11,8

95,8 (0,36)

0,223 (0,01)

20,1 (1,36)

18,6

120,3 (0,40)

0,266 (0,01)

25,9 (0,52)

26,1

109,0 (1,15)

0,270 (0,01)

33,1 (2,2)

34,6

104,0 (0,42)

0,251 (0,01)

39,5 (1,2)

Cuadro 2. valores del potencial y de la talla de la Zeta obtenidos en función del contenido del mole% DDAB para una serie de liposomas catiónicos

Conclusiones

La caracterización física de liposomas es de gran importancia en la comprensión de su conveniencia para un rango de aplicaciones. El Conocimiento del potencial de la zeta de una preparación del liposoma puede ayudar a predecir el destino de los liposomas in vivo. La Asociación de liposomas cargados con las moléculas opuesto cargadas puede ser vigilada midiendo el potencial de la zeta del complejo resultante.

La serie Nana de Zetasizer activa la caracterización rápida y repetible de la talla y del potencial de la zeta de liposomas como se detalla en esta nota de aplicación.

Nota: Un filete completo de referencias puede ser encontrado refiriendo al documento de fuente.

Fuente: “Talla y Caracterización Potencial de la Zeta de Liposomas Aniónicos y Catiónicos en El Zetasizer Nano”, Nota de Aplicación por los Instrumentos de Malvern.

Para más información sobre esta fuente visite por favor Malvern Instruments Ltd (REINO UNIDO) o los Instrumentos de Malvern (los E.E.U.U.).

Date Added: May 6, 2005 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 13. June 2013 01:48

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