Liposom adalah vesikel terdiri dari molekul lipid bilayer melampirkan volume berair. Mereka awalnya digunakan sebagai sistem model untuk mempelajari sifat membran seperti permeabilitas. Aplikasi terbaru telah berkonsentrasi pada menggunakan mereka sebagai kendaraan pemberian obat karena kemampuan menggabungkan bahan larut air dalam volume air atau bahan minyak larut dalam lipid. Liposom dapat dirancang untuk aplikasi khusus melalui kontrol komposisi lipid atau modifikasi permukaan dengan konjugasi antibodi atau peptida. Sebagai contoh, liposom kationik digunakan dalam aplikasi terapi gen karena kemampuan mereka untuk kompleks untuk DNA. Sifat yang Efek Nasib Liposom disuntikan secara intravena Nasib liposom disuntikkan intravena ditentukan oleh sejumlah properti. Dua yang paling penting adalah ukuran partikel dan potensial zeta. Kedua parameter tersebut dapat diukur pada Nano Zetasizer berbagai instrumen. Ukuran partikel diukur dengan menggunakan hamburan cahaya dinamis ( DLS ). Teknik ini mengukur waktu tergantung fluktuasi intensitas cahaya tersebar yang terjadi karena partikel yang menjalani gerak Brown. Analisis fluktuasi intensitas memungkinkan penentuan koefisien difusi partikel yang diubah menjadi distribusi ukuran. Mengukur Potensi Zeta Liposom Potensi zeta partikel adalah biaya keseluruhan yang memperoleh partikel dalam media tertentu. Pengetahuan tentang potensi zeta dari persiapan liposom dapat membantu untuk memprediksi nasib liposom in vivo. Pengukuran potensial zeta sampel dalam Nano Zetasizer dilakukan dengan menggunakan teknik Doppler velocimetry laser. Dalam teknik ini, tegangan diterapkan di sepasang elektroda di kedua ujung sel yang mengandung dispersi partikel. Partikel bermuatan tertarik ke elektroda malah dibebankan dan kecepatan mereka diukur dan dinyatakan dalam unit lapangan sebagai kekuatan mobilitas elektroforetik mereka. Informasi lebih lanjut tentang teknik ini dapat ditemukan dalam aplikasi lain dan catatan teknis di Malvern Instrumen situs. Catatan aplikasi ini meringkas ukuran dan pengukuran potensial zeta dilakukan pada liposom baik anionik dan kationik. Eksperimental Persiapan liposom Liposom disiapkan dengan metode sonication. Serangkaian liposom anionik dibuat dari berbagai campuran dipalmitoylphosphatidylcholine (DPPC) dan dipalmitoylphosphatidylglycerol di fosfat buffered saline (PBS) sebagaimana tercantum dalam tabel 1. Liposom kationik dibuat dari DPPC, kolesterol dan bromida surfaktan kationik dioctadecylammonium dimetil (DDAB) seperti diringkas dalam tabel 2. Dalam semua kasus, konsentrasi akhir dari liposom 4mg lipid / ml PBS. Tabel 1. Bobot dari DPPC dan DPPG digunakan dalam penyusunan serangkaian liposom anionik dalam fosfat buffered saline (PBS) | | | | 19 | 1 | 5.2 | 5 | 18 | 2 | 10.9 | 5 | 17 | 3 | 17.4 | 5 | 16 | 4 | 24.6 | 5 | 15 | 5 | 32.8 | 5 |
Tabel 2. Berat dari DPPC, kolesterol dan DDAB digunakan dalam penyusunan serangkaian liposom kationik di fosfat buffered saline (PBS). | | | | | 17 | 2 | 1 | 5.6 | 5 | 16 | 2 | 2 | 11.8 | 5 | 15 | 2 | 3 | 18.6 | 5 | 14 | 2 | 4 | 26.1 | 5 | 13 | 2 | 5 | 34.6 | 5 |
Lipid dan dicampur dilarutkan dalam kloroform (DPPG dilarutkan dalam campuran kloroform / metanol (2:1 v / v)) dan pelarut dihapus oleh penguapan rotary pada 60 ° C untuk memperoleh film lipid yang tipis. Volume tepat fosfat buffered saline (dipanaskan sebelumnya pada suhu 60 ° C) ditambahkan dan kapal penuh semangat gelisah pada mixer putar untuk menghasilkan vesikula multilamellar (MLVs). Para MLVs kemudian mandi disonikasi pada 60 ° C selama 15 menit untuk menghasilkan liposom unilamellar. Setelah sonication, sampel liposom diinkubasi pada 60 ° C selama 15 menit untuk memungkinkan mereka untuk anil. Karakterisasi liposom Semua pengukuran ukuran dan potensial zeta dibuat pada Zetasizer Nano ZS pada 25 ° C. Ukuran pengukuran dilakukan pada sampel liposom rapi, sedangkan sampel diencerkan 1 dalam 10 dengan PBS untuk pengukuran potensial zeta. The Nano ZS menggabungkan non-invasif backscatter (Nibs ™) optik untuk pengukuran ukuran. Sudut deteksi ukuran 173 ° memungkinkan pengukuran terkonsentrasi, sampel harus dibuat keruh. Namun, cahaya tersebar terdeteksi dari sampel selama pengukuran potensial zeta dibuat di sudut depan dari 12 °. Oleh karena itu perlu sinar laser menembus sampel dan sebagai konsekuensinya, konsentrasi sampel untuk pengukuran potensial zeta harus lebih rendah dari itu untuk ukuran. Hasil Anionik Liposom Hasil ukuran partikel dan pengukuran potensial zeta dari liposom berbagai anionik diringkas dalam tabel 3. Tabel ini menunjukkan rata-rata diameter z (diameter rata-rata berdasarkan intensitas cahaya yang tersebar), indeks polidispersitas (perkiraan lebar distribusi) dan nilai-nilai potensial zeta diperoleh rata-rata untuk sampel berbagai liposom. Z-rata nilai diameter sarana pengukuran berulang 3 (deviasi standar dalam tanda kurung) dilakukan pada sampel liposom rapi. Nilai-nilai potensial zeta adalah sarana dari 5 ulangi pengukuran (deviasi standar dalam tanda kurung) dilakukan pada sampel diencerkan (1 dalam 10 dengan PBS). Tabel 3. Z rata-rata diameter dalam nm, nilai indeks polidispersitas dan potensi zeta dalam mV liposom berbagai anionik disiapkan dalam PBS. Nilai-nilai deviasi standar dari pengukuran ulang ditunjukkan dalam tanda kurung. | | | | 5.2 | 133.8 (0.4) | 0.292 (0.01) | -9.0 (0.64) | 10.9 | 92.3 (0.49) | 0.269 (0.01) | -15.7 (1.36) | 17.4 | 107.2 (0.20) | 0.256 (0.01) | -22.5 (0.95) | 24.6 | 125.1 (0.60) | 0.261 (0.01) | -27.3 (1.29) | 32.8 | 89,2 (1,39) | 0.264 (0.01) | -31.4 (0.98) |
Hasil ukuran yang diperoleh untuk persiapan ini liposom anionik menunjukkan bahwa mandi sonikasi metode persiapan memberi berarti ukuran yang sama dan lebar distribusi. Potensi zeta dan nilai-nilai ukuran yang diplot dalam gambar 1 sebagai fungsi dari DPPG% mol. Data menunjukkan bahwa pengukuran yang sangat berulang untuk setiap sampel liposom dan menunjukkan tren yang diharapkan menjadi lebih negatif diisi dengan konten DPPG meningkat. Selain itu, hasil menunjukkan bahwa ukuran adalah independen dari komposisi liposom. 
Gambar 1. Potensial Zeta dan nilai ukuran yang diperoleh sebagai fungsi dari isi% mol DPPG untuk serangkaian liposom anionik. Kationik Liposom Tabel 4 merangkum hasil ukuran dan potensi zeta yang diperoleh untuk seri liposom kationik. Distribusi ukuran yang sama diperoleh dibandingkan dengan persiapan liposom anionik. Gambar 2 memperlihatkan plot potensi zeta dan ukuran diperoleh sebagai fungsi dari DDAB% mol dan menunjukkan peningkatan secara bertahap dalam muatan positif sebagai isi DDAB dari kenaikan liposom. Tabel 4. Z rata-rata diameter dalam nm, nilai indeks polidispersitas dan potensi zeta dalam mV liposom kationik berbagai disiapkan dalam PBS. Nilai-nilai deviasi standar dari pengukuran ulang ditunjukkan dalam tanda kurung. | | | | 5.6 | 116.6 (1.0) | 0.258 (0.01) | 10.3 (0.88) | 11.8 | 95.8 (0.36) | 0.223 (0.01) | 20.1 (1.36) | 18.6 | 120.3 (0.40) | 0.266 (0.01) | 25.9 (0.52) | 26.1 | 109.0 (1.15) | 0.270 (0.01) | 33.1 (2.2) | 34.6 | 104.0 (0.42) | 0.251 (0.01) | 39.5 (1.2) |
Gambar 2. Potensial Zeta dan nilai ukuran yang diperoleh sebagai fungsi dari isi% mol DDAB untuk serangkaian liposom kationik Kesimpulan Karakterisasi fisik liposom sangat penting dalam memahami kesesuaian mereka untuk berbagai aplikasi. Pengetahuan tentang potensi zeta dari persiapan liposom dapat membantu untuk memprediksi nasib liposom in vivo. Asosiasi liposom diisi dengan molekul malah dibebankan dapat dipantau dengan mengukur potensi zeta kompleks yang dihasilkan. The Zetasizer Nano seri memungkinkan karakterisasi cepat dan berulang dari kedua ukuran dan potensi zeta liposom sebagai rinci dalam aplikasi catatan. Catatan: Sebuah daftar lengkap dari referensi dapat ditemukan dengan mengacu ke dokumen sumber. Sumber: "Ukuran dan Karakterisasi Potensi Zeta anionik dan kationik Liposom pada Nano Zetasizer", Aplikasi Catatan oleh Malvern Instrumen. Untuk informasi lebih lanjut tentang sumber ini silakan kunjungi Malvern Instrumen Ltd (Inggris) atau Malvern Instrumen (AS) .
Date Added: May 6, 2005
Last Update: 9. October 2011 22:36
|