Emner som dekkes
Bakgrunn
Egenskaper som påvirker Fate of Intravenøst Injisert Liposomer
Måling Zeta Potensielle av Liposomer
Eksperimentell
Liposome Preparation
Liposome Karakterisering
Resultater
Anioniske Liposomer
Kationiske Liposomer
Konklusjoner
Bakgrunn |
Liposomer er vesikler sammensatt av en bilayer av lipid molekyler vedlagt en vandig volum. De ble opprinnelig brukt som modellsystemer for å studere membran egenskaper som permeabilitet. Nyere programmer har konsentrert seg om deres bruk som narkotika levering kjøretøy på grunn av evne til å innlemme vannløselige materialer i sine vandig volum eller olje løselig materialer i lipid bilayer. Liposomer kan være konstruert for spesifikke applikasjoner gjennom kontroll av lipid sammensetning eller endring av overflaten ved konjugering av antistoffer eller peptider. For eksempel er kationiske liposomer brukes i genterapi søknader på grunn av deres evne til komplisert å DNA. Egenskaper som påvirker Fate of Intravenøst Injisert Liposomer Skjebnen til intravenøst injisert liposomer bestemmes av en rekke eiendommer. To av de viktigste er partikkelstørrelse og Zeta potensial. Begge disse parametrene kan måles på Zetasizer Nano spekter av instrumenter. Partikkelstørrelse er målt ved hjelp av dynamisk lysspredning ( DLS ). Denne teknikken måler den tidsavhengige svingninger i intensiteten av spredte lys som oppstår fordi partiklene er under Brownske bevegelser. Analyse av disse intensitet svingninger gjør at fastsettelse av diffusjon koeffisientene av partiklene som er omgjort til en størrelse distribusjon. Måling Zeta Potensielle av Liposomer Den Zeta potensial for en partikkel er overordnet ansvarlig for at partikkel kjøper i et bestemt medium. Kunnskap om zeta potensialet for en liposome forberedelse kan bidra til å forutsi skjebnen til liposomer in vivo. Måling av zeta potensialet prøver i Zetasizer Nano er gjort ved hjelp av teknikken for laser Doppler velocimetry. I denne teknikken, er en spenning over et par elektroder i hver ende av en celle som inneholder partikkel spredning. Ladde partikler er tiltrukket av motsatt ladede elektroden og deres hastighet måles og uttrykkes i enheten feltstyrke som deres elektroforetiske mobilitet. Ytterligere informasjon om disse teknikkene kan finnes i andre program og tekniske notater på Malvern Instruments nettsiden. Denne applikasjonen oppmerksom oppsummerer størrelse og zeta potensialet målinger gjort på både anioniske og kationiske liposomer. Eksperimentell Liposome Preparation Liposomer var utarbeidet av sonikator metoden. En rekke av anioniske liposomer ble forberedt fra ulike blandinger av dipalmitoylphosphatidylcholine (DPPC) og dipalmitoylphosphatidylglycerol i fosfatbufret saltvann (PBS) som forklart i tabell 1. Kationiske liposomer var beredt fra DPPC, kolesterol og kationiske surfactant dimethyl dioctadecylammonium bromide (DDAB) som oppsummert i tabell 2. I alle tilfeller den endelige konsentrasjonen av liposomer var 4mg lipid / ml PBS. Tabell 1. Vekt av DPPC og DPPG brukes til fremstilling av en serie anioniske liposomer i fosfatbufret saltvann (PBS) Tabell 2. Weights av DPPC, kolesterol og DDAB brukes til fremstilling av en serie kationiske liposomer i fosfatbufret saltvann (PBS). | | | | | 17 | 2 | 1 | 4 | 26.1 | 5 | 13 | 2 | 5 | 34.6 | 5 |
Lipidene ble oppløst og mikset i kloroform (DPPG ble oppløst i en blanding av kloroform / metanol (2:1 v / v)) og løsemiddel fjernet av roterende fordampning ved 60 ° C for å få en tynn lipid film. Den passende mengde fosfat buffered saltvann (forvarmet ved 60 ° C) ble lagt og fartøyet kraftig opphisset på en roterende mixer å produsere multilamellar vesikler (MLVs). Den MLVs ble deretter bath sonicated ved 60 ° C i 15 minutter for å produsere unilamellar liposomer. Etter sonikator ble liposome prøvene inkubert ved 60 ° C i 15 minutter for å tillate dem å anneal. Liposome Karakterisering All dimensjonering og zeta potensialet målinger ble gjort på en Zetasizer Nano ZS ved 25 ° C. Dimensjonering målingene ble gjort på ryddig liposome prøvene, mens prøvene ble fortynnet 1 av 10 med PBS for zeta potensialet målingene. Nano ZS inkorporerer non-invasiv backscatter (nibs ™) optikk for dimensjonering målinger. Påvisning vinkel på 173 ° gjør at størrelsen målinger av konsentrerte, grumset prøver å bli gjort. Imidlertid er det spredte lyset registreres fra prøvene i løpet av en zeta potensialet måling gjort i den forreste vinkel på 12 °. Derfor laserstrålen behov for å trenge gjennom prøven og som en konsekvens, må prøven konsentrasjon for zeta potensialet målinger være lavere enn for dimensjonering. Resultater Anioniske Liposomer Resultatene av partikkel dimensjonering og zeta potensialet målinger av ulike anioniske liposomer er oppsummert i tabell 3. Denne tabellen viser z-gjennomsnittet diameter (gjennomsnittlig diameter basert på intensiteten av spredt lys), den polydispersitet index (et anslag over bredden på fordelingen) og gjennomsnittlig zeta potensialet verdier innhentet for de ulike liposome prøvene. Z-gjennomsnittlig diameter verdier er middel av 3 gjenta målinger (standardavvik i parentes) gjort på ryddig liposome prøvene. Den Zeta potensielle verdiene er midler av 5 gjenta målinger (standardavvik i parentes) gjort på fortynnede prøver (1 i 10 med PBS). Tabell 3. Z-gjennomsnittlig diameter på nm, polydispersitet indeksverdier og Zeta potensialer i mV av ulike anioniske liposomer utarbeidet i PBS. Standardavviket verdiene fra gjenta målingene er vist i parentes. | | | | 5.2 | 133.8 (0.4) | 0.292 (0.01) | -9.0 (0.64) | 10.9 | 92.3 (0.49) | 0.269 (0.01) | -15.7 (1.36) | 17.4 | 107.2 (0.20) | 0.256 (0.01) | -22.5 (0.95) | 24.6 | 125.1 (0.60) | 0.261 (0.01) | -27,3 (1,29)
Date Added: May 6, 2005
Last Update: 6. October 2011 20:39
|
|