Caracterização dos Lipossoma que Inclui O Tamanho e a Caracterização Potencial do Zeta de Lipossoma Aniónicos e Cationic Usando o Zetasizer Nano Dos Instrumentos de Malvern

Assuntos Cobertos

Fundo
     Propriedades que Efectuam o Destino de Lipossoma Intravenosa Injetados
     Potencial de Medição do Zeta dos Lipossoma
Experimental
     Preparação do Lipossoma
     Caracterização do Lipossoma
Resultados
     Lipossoma Aniónicos
     Lipossoma Cationic
Conclusões

Fundo

Os Lipossoma são vesículas compor de um bilayer das moléculas do lipido que encerram um volume aquoso. Foram usados inicialmente como os sistemas modelo para estudar propriedades da membrana tais como a permeabilidade. As aplicações Recentes concentraram-se em seu uso como os veículos de entrega da droga devido à capacidade de incorporar materiais solúveis em água em seu volume aquoso ou lubrificam materiais solúveis no bilayer do lipido. Os Lipossoma podem ser projectados para aplicações específicas com o controle da composição de lipido ou a alteração da superfície pela conjugação dos anticorpos ou dos peptides. Por exemplo, os lipossoma cationic são usados nas aplicações da terapia genética devido a sua capacidade ao complexo ao ADN.

Propriedades que Efectuam o Destino de Lipossoma Intravenosa Injetados

O destino de lipossoma intravenosa injetados é determinado por um número de propriedades. Dois do mais importante são tamanho de partícula e potencial do zeta. Both of these parâmetros podem ser medidos na escala Nano de Zetasizer dos instrumentos. O tamanho de Partícula é medido usando a dispersão de luz dinâmica (DLS). Esta técnica mede as flutuações tempo-dependentes na intensidade da luz dispersada que ocorrem porque as partículas se estão submetendo ao movimento Brownian. A Análise destas flutuações da intensidade permite a determinação dos coeficientes de difusão das partículas que são convertidas em uma distribuição de tamanho.

Potencial de Medição do Zeta dos Lipossoma

O potencial do zeta de uma partícula é a carga total que a partícula adquire em um media particular. O Conhecimento do potencial do zeta de uma preparação do lipossoma pode ajudar a prever in vivo o destino dos lipossoma. A Medida do potencial do zeta das amostras no Zetasizer Nano é feita usando a técnica do laser Doppler velocimetry. Nesta técnica, uma tensão é aplicada através de um par de eléctrodos em um ou outro fim de um contendo células a dispersão da partícula. As partículas Cobradas são atraídas ao eléctrodo oposta cobrado e sua velocidade é medida e expressada na força de campo da unidade como sua mobilidade electrophoretic. A Informações adicionais nestas técnicas pode ser encontrada em outras aplicação e notas técnicas no Web site dos Instrumentos de Malvern.

Esta nota de aplicação resume as medidas potenciais do tamanho e do zeta feitas em lipossoma aniónicos e cationic.

Experimental

Preparação do Lipossoma

Os Lipossoma foram preparados pelo método do sonication. Uma série de lipossoma aniónicos foi preparada das várias misturas do dipalmitoylphosphatidylcholine (DPPC) e o dipalmitoylphosphatidylglycerol em salino protegido fosfato (PBS) como detalhado em lipossoma Cationic da tabela 1. foi preparado de DPPC, de colesterol e do brometo dimethyl do dioctadecylammonium do surfactant cationic (DDAB) como resumido na tabela 2. Em todos os casos as concentrações finais dos lipossoma eram 4mg lipid/ml PBS.

A Tabela 1. Pesos de DPPC e de DPPG usados na preparação de uma série de lipossoma aniónicos no fosfato protegeu salino (PBS)

DPPC (magnésio)

DPPG (magnésio)

DPPG (toupeira %)

PBS (ml)

19

1

5,2

5

18

2

10,9

5

17

3

17,4

5

16

4

24,6

5

15

5

32,8

5

A Tabela 2. Pesos de DPPC, de colesterol e de DDAB usados na preparação de uma série de lipossoma cationic no fosfato protegeu salino (PBS).

DPPC (magnésio)

Colesterol (magnésio)

DDAB (magnésio)

DDAB (toupeira %)

PBS (ml)

17

2

1

5,6

5

16

2

2

11,8

5

15

2

3

18,6

5

14

2

4

26,1

5

13

2

5

34,6

5

Os lipidos foram dissolvidos e misturados no clorofórmio (DPPG foi dissolvido em uma mistura do clorofórmio/metanol (2:1 v/v)) e do solvente removido pela evaporação giratória em 60°C para obter um filme fino do lipido. O volume apropriado de fosfato protegeu salino (pré-aquecido em 60°C) foi adicionado e a embarcação vigorosa agitado em um misturador giratório para produzir as vesículas multilamellar (MLVs). O MLVs era então banho sonicated em 60°C por 15 minutos para produzir lipossoma unilamellar. Após o sonication, as amostras do lipossoma foram incubadas em 60°C por 15 minutos para permitir que recozam.

Caracterização do Lipossoma

Todas As medidas potenciais da cola e do zeta foram feitas em um Zetasizer que ZS Nano em medidas da Cola 25°C. foram feitos nas amostras puras do lipossoma, visto que as amostras foram diluídas 1 em 10 com o PBS para as medidas do potencial do zeta. O ZS Nano incorpora sistemas óticos não invasores do backscatter (NIBS™) para medidas de execução sob medida. O ângulo da detecção de medidas do tamanho 173°enables das amostras concentradas, turvos a ser feitas. Contudo, a luz dispersada detectada das amostras durante uma medida potencial do zeta é feita no ângulo dianteiro de 12°. Conseqüentemente o raio laser precisa de penetrar a amostra e consequentemente, a concentração da amostra para medidas potenciais do zeta deve ser mais baixa do que aquela para fazer sob medida.

Resultados

Lipossoma Aniónicos

Os resultados da cola da partícula e as medidas potenciais do zeta dos vários lipossoma aniónicos são resumidos na tabela 3. Esta tabela mostra os diâmetros z-médios (os diâmetros médios baseados na intensidade da luz dispersada), o deslocamento predeterminado da polidispersidade (uma avaliação da largura da distribuição) e os valores potenciais do zeta médio obtidos para as várias amostras do lipossoma. Os valores z-médios do diâmetro são os meios de 3 medidas da repetição (desvios padrão nos suportes) feitas nas amostras puras do lipossoma. Os valores potenciais do zeta são os meios de 5 medidas da repetição (desvios padrão nos suportes) feitas nas amostras diluídas (1 em 10 com PBS).

Tabela 3. Os diâmetros z-médios no nanômetro, nos valores de deslocamento predeterminado da polidispersidade e nos potenciais do zeta no milivolt de vários lipossoma aniónicos prepararam-se em PBS. Os valores do desvio padrão das medidas da repetição são mostrados nos suportes.

% da Toupeira DPPG

Diâmetro z-Avoirdupois no nanômetro (SD)

Polidispersidade (SD)

Potencial do Zeta no milivolt (SD)

5,2

133,8 (0,4)

0,292 (0,01)

-9,0 (0,64)

10,9

92,3 (0,49)

0,269 (0,01)

-15,7 (1,36)

17,4

107,2 (0,20)

0,256 (0,01)

-22,5 (0,95)

24,6

125,1 (0,60)

0,261 (0,01)

-27,3 (1,29)

32,8

89,2 (1,39)

0,264 (0,01)

-31,4 (0,98)

Os resultados da cola obtidos para a mostra aniónica destas preparações do lipossoma que o método do sonication do banho da preparação dá meios do tamanho e larguras similares da distribuição.

Os valores do potencial e do tamanho do zeta são traçados em figura 1 em função do mole% DPPG. Os dados mostram que as medidas são muito repetíveis para cada amostra do lipossoma e mostram a tendência prevista de se tornar mais negativamente - cobrado com o aumento do índice de DPPG. Além, os resultados mostram que o tamanho é independente da composição do lipossoma.

Figura 1. valores do potencial e do tamanho do Zeta obtidos em função do índice de mole% DPPG para uma série de lipossoma aniónicos.

Lipossoma Cationic

A Tabela 4 resume os resultados potenciais da cola e do zeta obtidos para a série de lipossoma cationic. As distribuições de tamanho Similares foram obtidas compararam às preparações aniónicas do lipossoma. Figura 2 mostra um lote dos resultados do potencial e do tamanho do zeta obtidos em função do mole% DDAB e mostra um aumento gradual na carga positiva enquanto o índice de DDAB dos lipossoma aumenta.

Tabela 4. Os diâmetros z-médios no nanômetro, nos valores de deslocamento predeterminado da polidispersidade e nos potenciais do zeta no milivolt de vários lipossoma cationic prepararam-se em PBS. Os valores do desvio padrão das medidas da repetição são mostrados nos suportes.

% da Toupeira DDAB

Diâmetro z-Avoirdupois no nanômetro (SD)

Polidispersidade (SD)

Potencial do Zeta no milivolt (SD)

5,6

116,6 (1,0)

0,258 (0,01)

10,3 (0,88)

11,8

95,8 (0,36)

0,223 (0,01)

20,1 (1,36)

18,6

120,3 (0,40)

0,266 (0,01)

25,9 (0,52)

26,1

109,0 (1,15)

0,270 (0,01)

33,1 (2,2)

34,6

104,0 (0,42)

0,251 (0,01)

39,5 (1,2)

Figura 2. valores do potencial e do tamanho do Zeta obtidos em função do índice de mole% DDAB para uma série de lipossoma cationic

Conclusões

A caracterização física dos lipossoma é da grande importancia em compreender sua conformidade para uma escala de aplicações. O Conhecimento do potencial do zeta de uma preparação do lipossoma pode ajudar a prever in vivo o destino dos lipossoma. A Associação de lipossoma cobrados com as moléculas oposta cobradas pode ser monitorada medindo o potencial do zeta do complexo resultante.

A série Nano de Zetasizer permite a caracterização rápida e repetível do tamanho e do potencial do zeta dos lipossoma como detalhado nesta nota de aplicação.

Nota: Uma lista completa de referências pode ser encontrada com referência ao original de fonte.

Source: “Tamanho e Caracterização Potencial do Zeta de Lipossoma Aniónicos e Cationic No Zetasizer Nano”, Nota de Aplicação por Instrumentos de Malvern.

Para obter mais informações sobre desta fonte visite por favor Instrumentos Ltd de Malvern (REINO UNIDO) ou Instrumentos de Malvern (EUA).

Date Added: May 6, 2005 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 13. June 2013 01:43

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