Характеризация Липосом Включая Размер и Характеризацию Zeta Потенциальную Анионных и Катионоактивных Липосом Используя Zetasizer Nano От Аппаратур Malvern

Покрытые Темы

Предпосылка
     Свойства которые Производят Эффект Судьба Внутривенно Впрыснутых Липосом
     Измеряя Потенциал Zeta Липосом
Экспириментально
     Подготовка Липосомы
     Характеризация Липосомы
Результаты
     Анионные Липосомы
     Катионоактивные Липосомы
Заключения

Предпосылка

Липосомы vesicles составленные bilayer молекул липида заключая водяной том. Они первоначально были использованы как модельные системы для того чтобы изучить свойства мембраны как проницаемость. Недавние применения концентрировали на их пользе как корабли поставки снадобья должные к способности включать водорастворимые материалы в их водяном томе или смазывают материалы soluble в bilayer липида. Липосомы можно конструировать для специфических применений через управление состава липида или изменение поверхности спряжением антител или пептидов. Например, катионоактивные липосомы использованы в применениях терапией гена должных к их способности к комплексу к ДНА.

Свойства которые Производят Эффект Судьба Внутривенно Впрыснутых Липосом

Судьба внутривенно впрыснутых липосом определена несколькими свойств. 2 из самой важной размер частицы и потенциал zeta. Оба из этих параметров можно измерить на ряде Zetasizer Nano аппаратур. Размер Частицы измерен используя динамический светлый разбрасывать (DLS). Этот метод измеряет врем-зависимые зыбкост в интенсивности разбросанного света которые происходят потому что частицы проходят Броуновское движение. Анализ этих зыбкост интенсивности включает определение коэффициентов диффузии частиц которые преобразованы в распределение по размеру.

Измеряя Потенциал Zeta Липосом

Потенциал zeta частицы общая обязанность которую частица приобретает в определенном средстве. Знание потенциала zeta подготовки липосомы может помочь предсказать судьбу липосом внутри - vivo. Измерение потенциала zeta образцов в Zetasizer Nano сделано используя метод лазера Doppler velocimetry. В этом методе, напряжение тока прикладной через пару электродов на любом конце клетки содержа рассеивание частицы. Запряженные частицы привлечены к противоположно порученному электроду и их скорость измерена и выражена в прочности поля блока как их электрофоретическая подвижность частиц. Более подробная информация на этих методах можно найти в других применении и технических примечаниях на вебсайте Аппаратур Malvern.

Это примечание по применению суммирует измерения размера и zeta потенциальные сделанные и на анионных и катионоактивных липосомах.

Экспириментально

Подготовка Липосомы

Липосомы были подготовлены методом sonication. Серия анионных липосом была подготовлена от различных смесей dipalmitoylphosphatidylcholine (DPPC) и dipalmitoylphosphatidylglycerol в saline амортизированное фосфатом (PBS) как детализировано в липосомами таблицы 1. Катионоактивными было подготовлено от DPPC, холестерола и бромида dioctadecylammonium катионоактивного сурфактанта этанного (DDAB) как суммировано в таблице 2. В все случаи окончательная концентрация липосом были 4mg lipid/ml PBS.

Таблица 1. Веса DPPC и DPPG используемых в подготовке серии анионных липосом в фосфате амортизировала saline (PBS)

DPPC (mg)

DPPG (mg)

DPPG (моль %)

PBS (ml)

19

1

5,2

5

18

2

10,9

5

17

3

17,4

5

16

4

24,6

5

15

5

32,8

5

Таблица 2. Веса DPPC, холестерола и DDAB используемых в подготовке серии катионоактивных липосом в фосфате амортизировала saline (PBS).

DPPC (mg)

Холестерол (mg)

DDAB (mg)

DDAB (моль %)

PBS (ml)

17

2

1

5,6

5

16

2

2

11,8

5

15

2

3

18,6

5

14

2

4

26,1

5

13

2

5

34,6

5

Липиды были растворены и были смешаны в хлороформе (DPPG было растворено в смеси хлороформа/метанола (2:1 v/v)) и растворитель, котор извлекло роторное испарение на 60°C для того чтобы получить тонкий фильм липида. Был добавлены, что и сосуд ядрено был агитирован на роторном смесителе произвел соотвествующий том saline амортизированное фосфатом (подогрето на 60°C) multilamellar vesicles (MLVs). MLVs было после этого ванной sonicated на 60°C на 15 минут для того чтобы произвести unilamellar липосомы. После sonication, образцы липосомы были инкубированы на 60°C на 15 минут для того чтобы позволить им обжечь.

Характеризация Липосомы

Все измерения загрунтовкы и zeta потенциальные были сделаны на Zetasizer Nano ZS на измерениях Загрунтовкы 25°C. были сделаны на опрятных образцах липосомы, тогда как образцы были разбавлены 1 в 10 с PBS для измерений потенциала zeta. Nano ZS включает неинвазивную оптику backscatter (NIBS™) для определяя размер измерений. Угол обнаружения измерений размера 173°enables сконцентрированных, мутьевых образцов, котор нужно сделать. Однако, разбросанный свет обнаруженный от образцов во время измерения zeta потенциального сделан на переднем угле 12°. Поэтому лазерному лучу нужно прорезать образец и как последствие, концентрация образца для измерений zeta потенциальных должна быть более низка чем концентрацидля определять размер.

Результаты

Анионные Липосомы

Результаты загрунтовкы частицы и измерения zeta потенциальные различных анионных липосом суммированы в таблице 3. Эта таблица показывает z-средние диаметры (средние диаметры основанные на интенсивности разбросанного света), индекс polydispersity (предварительный подчет ширины распределения) и значения среднего zeta потенциальные полученные для различных образцов липосомы. Z-средние значения диаметра середины 3 измерений повторения (стандартных отступлений в кронштейнах) сделанных на опрятных образцах липосомы. Значения zeta потенциальные середины 5 измерений повторения (стандартных отступлений в кронштейнах) сделанных на разбавленных образцах (1 в 10 с PBS).

Таблица 3. Z-средние диаметры в nm, индексных значениях polydispersity и потенциалах zeta в mV различных анионных липосом подготовили в PBS. Значения стандартного отступления от измерений повторения показаны в кронштейнах.

% Моли DPPG

Dia z-Av в nm (SD)

Polydispersity (SD)

Потенциал Zeta в mV (SD)

5,2

133,8 (0,4)

0,292 (0,01)

-9,0 (0,64)

10,9

92,3 (0,49)

0,269 (0,01)

-15,7 (1,36)

17,4

107,2 (0,20)

0,256 (0,01)

-22,5 (0,95)

24,6

125,1 (0,60)

0,261 (0,01)

-27,3 (1,29)

32,8

89,2 (1,39)

0,264 (0,01)

-31,4 (0,98)

Результаты загрунтовкы полученные для выставки этих анионной подготовок липосомы что метод sonication ванны подготовки дает подобные середины размера и ширины распределения.

Значения потенциала и размера zeta прокладывать курс в диаграмме 1 как функция mole% DPPG. На данные показано что измерения очень repeatable для каждого образца липосомы и показывают предпологаемую тенденцию становления более отрицательного - поручено 0Nс увеличением содержанием DPPG. В добавлении, результаты показывают что размер независимый состава липосомы.

Диаграмма 1. значения потенциала и размера Zeta полученные как функция содержания mole% DPPG для серии анионных липосом.

Катионоактивные Липосомы

Таблица 4 суммирует результаты загрунтовкы и zeta потенциальные полученные для серии катионоактивных липосом. Были получены Подобные распределения по размеру сравнили к анионным подготовкам липосомы. На Диаграмму 2 показано график результатов потенциала и размера zeta полученных как функция mole% DDAB и показано постепенно увеличение в положительной обязанности по мере того как содержание DDAB липосом увеличивает.

Таблица 4. Z-средние диаметры в nm, индексных значениях polydispersity и потенциалах zeta в mV различных катионоактивных липосом подготовили в PBS. Значения стандартного отступления от измерений повторения показаны в кронштейнах.

% Моли DDAB

Dia z-Av в nm (SD)

Polydispersity (SD)

Потенциал Zeta в mV (SD)

5,6

116,6 (1,0)

0,258 (0,01)

10,3 (0,88)

11,8

95,8 (0,36)

0,223 (0,01)

20,1 (1,36)

18,6

120,3 (0,40)

0,266 (0,01)

25,9 (0,52)

26,1

109,0 (1,15)

0,270 (0,01)

33,1 (2,2)

34,6

104,0 (0,42)

0,251 (0,01)

39,5 (1.2)

Диаграмма 2. значения потенциала и размера Zeta полученные как функция содержания mole% DDAB для серии катионоактивных липосом

Заключения

Физическая характеризация липосом большого значения в понимать их пригодность для диапозона применения. Знание потенциала zeta подготовки липосомы может помочь предсказать судьбу липосом внутри - vivo. Ассоциация порученных липосом с противоположно порученными молекулами может быть проконтролирована путем измерять потенциал zeta приводя к комплекса.

Серия Zetasizer Nano включает быструю и repeatable характеризацию как размера, так и потенциала zeta липосом как детализировано в этим примечанием по применению.

Примечание: Полный список справок может быть найден путем ссылаться к исходному документу.

Источник: «Размер и Характеризация Zeta Потенциальная Анионных и Катионоактивных Липосом на Zetasizer Nano», Примечание по Применению Аппаратурами Malvern.

Для больше информации на этом источнике пожалуйста посетите Аппаратуры Ltd Malvern (ВЕЛИКОБРИТАНИЮ) или Аппаратуры Malvern (США).

Date Added: May 6, 2005 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 13. June 2013 01:45

Ask A Question

Do you have a question you'd like to ask regarding this article?

Leave your feedback
Submit