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जिन विषय
पृष्ठभूमि
प्रोटीन के विकृतीकरण
प्रोटीन की Characterisation के लिए गतिशील लाइट छितराया
प्रोटीन गलनांक
प्रोटीन के गलनांक को प्रभावित कारक
Malvern Zetasizer नैनो प्रणाली
पृष्ठभूमि
Polypeptide चेन, 20 विभिन्न अमीनो एसिड के प्रकार के एक पूल से कोशिका के भीतर संश्लेषित प्रोटीन बना रहे हैं. मानव निर्मित और यादृच्छिक कुंडल जैविक पॉलिमर के विपरीत, प्रोटीन पॉलीपेप्टाइड चेन स्वभाव राज्य में अद्वितीय तीन आयामी संरचना में जोड़ रहे हैं. इन संरचनाओं electrostatic और hydrophobic बातचीत का एक संयोजन द्वारा स्थिर ढांचे के भीतर अमीनो एसिड के पक्ष श्रृंखला के बीच कई हाइड्रोजन बांड के गठन के साथ साथ.
प्रोटीन के विकृतीकरण
प्रोटीन जैविक प्रणालियों के भीतर प्रतिक्रियाओं catalysing और छोटे अणुओं या आयनों परिवहन जैसे विशिष्ट कार्यों, प्रदर्शन विकसित किया गया. इस कार्यशीलता को प्रोटीन की संरचना के भीतर लचीलेपन की एक बड़ी डिग्री आवश्यक है. जैसे, प्रोटीन संरचना स्थिर बातचीत सिर्फ पर्यावरण की स्थिति का एक संकीर्ण सीमा के भीतर संरचना को बनाए रखने के लिए पर्याप्त हैं. यदि समाधान की स्थिति इस रेंज, पीएच या तापमान, entropically संचालित विकृतीकरण या जल्दी से हो सकता है खुलासा में एक परिवर्तन के माध्यम से जैसे बाहर हैं. जब विकृतीकरण होता है, प्रोटीन के छोटे आकार का एक ही आणविक वजन के एक यादृच्छिक कुंडल बहुलक के साथ संगत मान के लिए बढ़ जाती है. Chaotropic (एकत्रीकरण पर रोक लगाने के) एजेंट के अभाव में, अंतर - बहुलक hydrophobic बातचीत जल्दी से गैर विशिष्ट विकृत पॉलीपेप्टाइड श्रृंखला के एकत्रीकरण के लिए नेतृत्व कर सकते हैं. विकृतीकरण प्रक्रिया के आकार में बाद में परिवर्तन के साथ साथ, प्रतिनिधित्व चित्र 1 में दिखाया गया है.
चित्रा 1. योजनाबद्ध प्रोटीन विकृतीकरण प्रक्रिया और hydrodynamic आकार में बाद में परिवर्तन का ब्यौरा ठोस वृत्त के व्यास द्वारा संकेत दिया .
प्रोटीन की Characterisation के लिए गतिशील लाइट छितराया
गतिशील प्रकाश बिखरने (DLS) लंबे समय से एक प्रोटीन लक्षण वर्णन उपकरण के रूप में इस्तेमाल किया गया है. DLS में कणों की ब्राउनियन गति से मापा जाता है, है और hydrodynamic आकार स्टोक्स आइंस्टीन समीकरण का उपयोग कर की गणना की जाती है. DLS की संवेदनशीलता अलग oligomeric और चतुर्धातुक प्रोटीन राज्यों भेद करने के लिए पर्याप्त है, और आदर्श denaturing शर्तों प्रोटीन संरचना की स्थिरता की निगरानी के लिए अनुकूल है.
प्रोटीन गलनांक
प्रोटीन गलनांक (टीएम) के तापमान पर जो प्रोटीन denatures के रूप में परिभाषित किया गया है. आकार में परिवर्तन है कि प्रोटीन विकृतीकरण accompanies आसानी DLS तकनीक का उपयोग करने के लिए पहचान की है. उदाहरण के लिए चित्रा 2 पर विचार करें, जो पता चलता है कि तापमान निर्भर जेड औसत व्यास और फॉस्फेट में Ovalbumin के लिए बिखरने तीव्रता खारा (पीबीएस) के साथ एक मापा buffered Zetasizer नैनो ZS. तापमान में 71 से कम डिग्री सेल्सियस, आकार और बिखरने तीव्रता लगातार कर रहे हैं, एक स्थिर तृतीयक संरचना का सुझाव दे. 71 से कम डिग्री सेल्सियस और उच्च, दोनों के आकार और बिखरने तीव्रता तापमान के साथ तेजी से वृद्धि, विकृत समुच्चय की उपस्थिति का संकेत है.
चित्रा पिघलती 2. बिंदु और पीबीएस में Ovalbumin के लिए ट्रेस हिस्टैरिसीस.