蛋白质使用 Zetasizer 纳诺系统的熔点描述特性从 Malvern 仪器

包括的事宜

背景
蛋白质的变性
动态光散射蛋白质的描述特性的
蛋白质熔点
影响蛋白质的熔点系数
Malvern Zetasizer 纳诺系统

背景

蛋白质由多缩氨基酸链子组成,综合在从 20 个不同氨基酸类型池的细胞内。 与人造和任意卷生物聚合物对比,蛋白质的多缩氨基酸链子被折叠到在这个 natured 状态的唯一三维的结构。 这些结构被稳定用静电和疏水交往的组合,以及多个氢键的形成在氨基酸的侧链的之间在这个结构内的。

蛋白质的变性

蛋白质演变执行在生物系统内的特定功能,例如摧化回应和运输小的分子或离子。 此功能需要一个大程度在蛋白质的结构的内灵活性。 同样地,稳定蛋白质结构的交往是公正满足维护在各种各样的环境条件内的结构。 如果解决方法情况是在此范围外面,即通过在这个酸碱度或温度上的一个变化, entropically 被驱动的变性或展开可能迅速发生。 当变性发生时,小型蛋白质增加到值一致与同一分子量的一个任意卷聚合物。 在没有 chaotropic (禁止的汇总) 作用者时,相互聚合物疏水交往可能迅速导致被弈质的多缩氨基酸链子的未指明的汇总。 变性进程的表示,以及随后的更改在表 1. 在大小上显示。

图 1. 详述的概要蛋白质变性进程和随后的变化在固定的圈子的直径表示的水力范围上。

动态光散射蛋白质的描述特性的

动态光散射 (DLS)长期使用了作为蛋白质描述特性工具。 在 DLS,微粒的布朗运动被评定,使用升火爱因斯坦等式,并且这个水力范围被计算。 DLS 区分是满足区分不同的齐聚物和四个一组的蛋白质状态和理想地说适用与监控蛋白质结构的稳定性对弈质情况的。

蛋白质熔点

蛋白质熔点 (TM) 被定义作为蛋白质弈质的温度。 随附于蛋白质变性使用 DLS 技术的更改容易地在大小上被识别。 例如考虑图 2,在磷酸缓冲盐显示这个温度从属的 Z 平均直径和卵白蛋白的分散强度 (PBS)评定与 Zetasizer 纳诺 ZS。 在温度较少比 71°C,范围和分散强度是常数,建议一个稳定的三级结构。 在 71°C 和更高,范围和分散强度增量指数与温度,指示被弈质的综合出现。

图 2. 熔点跟踪和迟滞现象卵白蛋白的在 PBS。

影响蛋白质的熔点系数

由于氨基酸唯一主要顺序与特定蛋白质类型相关,熔点可能极大有所不同。 解决方法适应,即酸碱度和盐含量,并且张贴平移修改,即糖基化,可能也有对蛋白质结构并且这个熔化的温度的稳定性的明显影响。 特别地如果蛋白质为综合化是注定的到一种药品或公式化,熔点评定然后是在目标蛋白质的总描述特性的一个重要步骤。 图 3 在 PBS 显示一系列的蛋白质的熔点跟踪。 使用一架 1°C 递增温度舷梯和一 3 周详平衡时光在每个评定温度,自动化的评定收集了与 Zetasizer 纳诺 ZS

图 3. 熔点跟踪和 TM 值一系列的蛋白质的在 PBS。

Malvern Zetasizer 纳诺系统

ZetasizerMalvern 仪器的纳诺 ZS 是包括硬件和软件的第一个商业契约联合的动态,静态和电泳光散射评定的,产生这位研究员各种各样的范例属性,包括范围、分子量和 Zeta 潜在。 系统特别地被设计符合低浓度和范例数量要求典型地与配药和生物化子的应用相关,以及胶质应用的高浓度需求。 满足需求的此唯一混合通过一个背景散射的光学系统和一个新颖的细胞房间的设计的综合化是实现的。 作为这些功能结果,样本大小的 Zetasizer 纳诺 ZS 说明和浓度超出那些其他商业可用的 DLS 仪器的,有 0.6nm 的范围范围的对 6um 和 0.1mg/mL 溶菌酶的浓度范围对 40% w/v。 作为被添加的附加, Zetasizer 纳诺 ZS 硬件是优选的自,并且这个软件包括一个唯一 “一单击”评定,分析,并且报告被设计的功能使新的用户经验曲线减到最小。

Date Added: May 9, 2005 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 13. June 2013 01:13

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