蛋白質使用 Zetasizer 納諾系統的熔點描述特性從 Malvern 儀器

包括的事宜

背景
蛋白質的變性
動態光散射蛋白質的描述特性的
蛋白質熔點
影響蛋白質的熔點系數
Malvern Zetasizer 納諾系統

背景

蛋白質由多縮氨基酸鏈子組成,綜合在從 20 個不同氨基酸類型池的細胞內。 與人造和任意捲生物聚合物對比,蛋白質的多縮氨基酸鏈子被摺疊到在這個 natured 狀態的唯一三維的結構。 這些結構被穩定用靜電和疏水交往的組合,以及多個氫鍵的形成在氨基酸的側鏈的之間在這個結構內的。

蛋白質的變性

蛋白質演變執行在生物系統內的特定功能,例如摧化回應和運輸小的分子或離子。 此功能需要一個大程度在蛋白質的結構的內靈活性。 同樣地,穩定蛋白質結構的交往是公正滿足維護在各種各樣的環境條件內的結構。 如果解決方法情況是在此範圍外面,即通過在這個酸碱度或溫度上的一個變化, entropically 被驅動的變性或展開可能迅速發生。 當變性發生時,小型蛋白質增加到值一致與同一分子量的一個任意捲聚合物。 在沒有 chaotropic (禁止的彙總) 作用者時,相互聚合物疏水交往可能迅速導致被弈質的多縮氨基酸鏈子的未指明的彙總。 變性進程的表示,以及隨後的更改在表 1. 在大小上顯示。

圖 1. 詳述的概要蛋白質變性進程和隨後的變化在固定的圈子的直徑表示的水力範圍上。

動態光散射蛋白質的描述特性的

動態光散射 (DLS)長期使用了作為蛋白質描述特性工具。 在 DLS,微粒的布朗運動被評定,使用昇火愛因斯坦等式,并且這個水力範圍被計算。 DLS 區分是滿足區分不同的齊聚物和四個一組的蛋白質狀態和理想地說適用與監控蛋白質結構的穩定性對弈質情況的。

蛋白質熔點

蛋白質熔點 (TM) 被定義作為蛋白質弈質的溫度。 隨附於蛋白質變性使用 DLS 技術的更改容易地在大小上被識別。 例如考慮圖 2,在磷酸緩衝鹽顯示這個溫度從屬的 Z 平均直徑和卵白蛋白的分散強度 (PBS)評定與 Zetasizer 納諾 ZS。 在溫度較少比 71°C,範圍和分散強度是常數,建議一個穩定的三級結構。 在 71°C 和更高,範圍和分散強度增量指數與溫度,指示被弈質的綜合出現。

圖 2. 熔點跟蹤和遲滯現象卵白蛋白的在 PBS。

影響蛋白質的熔點系數

由於氨基酸唯一主要順序與特定蛋白質類型相關,熔點可能極大有所不同。 解決方法適應,即酸碱度和鹽含量,并且張貼平移修改,即糖基化,可能也有對蛋白質結構並且這個熔化的溫度的穩定性的明顯影響。 特別地如果蛋白質為綜合化是注定的到一種藥品或公式化,熔點評定然後是在目標蛋白質的總描述特性的一個重要步驟。 圖 3 在 PBS 顯示一系列的蛋白質的熔點跟蹤。 使用一架 1°C 遞增溫度舷梯和一 3 周詳平衡時光在每個評定溫度,自動化的評定收集了與 Zetasizer 納諾 ZS

圖 3. 熔點跟蹤和 TM 值一系列的蛋白質的在 PBS。

Malvern Zetasizer 納諾系統

ZetasizerMalvern 儀器的納諾 ZS 是包括硬件和軟件的第一個商業契約聯合的動態,靜態和電泳光散射評定的,產生這位研究員各種各樣的範例屬性,包括範圍、分子量和 Zeta 潛在。 系統特別地被設計符合低濃度和範例數量要求典型地與配藥和生物化子的應用相關,以及膠質應用的高濃度需求。 滿足需求的此唯一混合通過一個背景散射的光學系統和一個新穎的細胞房間的設計的綜合化是實現的。 作為這些功能結果,樣本大小的 Zetasizer 納諾 ZS 說明和濃度超出那些其他商業可用的 DLS 儀器的,有 0.6nm 的範圍範圍的對 6um 和 0.1mg/mL 溶菌酶的濃度範圍對 40% w/v。 作為被添加的附加, Zetasizer 納諾 ZS 硬件是優選的自,并且這個軟件包括一個唯一 「一單擊」評定,分析,并且報告被設計的功能使新的用戶經驗曲線減到最小。

Date Added: May 9, 2005 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 13. June 2013 01:16

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