Agregación Electroestática de la â-Lactoglobulina Usando la Dispersión Luminosa Cuasi-Eléctrica por Malvern

Temas Revestidos

Antecedentes
Experimental
     Preparación de la Muestra
     Determinación de la Talla de Partícula
Resultados

Antecedentes

En 1934, Palmer primero describió la separación de ß-Lactoglobulina (ß-LG) de la fracción del suero de la leche bovina. Este descubrimiento fue hecho cincuenta años antes de que la estructura real se podría aclarar con la cristalografía de la Radiografía. La mayoría de éstos estudia el centro alrededor de la agregación provocada por el calor puesto que ésta es de grandes interés e importancia al tramitación de los productos lácteos. A Pesar De los años de investigación, la función específica de la ß-Lactoglobulina debe todavía ser entendida totalmente. El propósito de este trabajo es proporcionar a un estudio de la agregación electroestática de ß-LG en la fuerza iónica inferior (i) y en los valores de pH debajo de la punta isoeléctrica (pI) donde la agregación ocurre a un tipo bastante lento para ser evaluada por la dispersión luminosa cuasielástica (QELS).

Experimental

Preparación de la Muestra

ß-LG A&B, comprado de la Sigma Aldrich y usado sin la purificación adicional, fue disuelto en el NaCl 4.5mM preparado del agua de Milli-Q. ß-LG disuelto entonces fue aumentado a pH 9 para desasociar la proteína en su especie monomérica. Un volumen igual de NaCl 4.5mM fue preparado que contenía la cantidad apropiada de Ácido clorhídrico de los 0.1M para traer las soluciones combinadas a la meta pH y a la concentración de 4,2 y de 1mg/mL respectivamente. Ambas soluciones fueron filtradas (0,2 filtros del µm, Sartorio AG, Alemania), y después mezcladas inmediatamente antes de análisis.

Determinación de la Talla de Partícula

Las distribuciones Dimensionales de los agregados de ß-LG eran resueltas usando el Malvern Zetasizer ZS Nano. Los tiempos de la Correlación eran siete segundos por corrida y tres corridas por la medición. QELS fue utilizado para determinar las distribuciones dimensionales durante cincuenta minutos.

Resultados

El Cuadro 1 muestra a intensidad la distribución dimensional cerco durante el experimento cinético en el tiempo (t) = 0. Como evidente aquí, los resultados de QELS indican eso, agregados de ß-LG en dos poblaciones distintas de la talla casi inmediatamente.

Cuadro 1. distribución dimensional de la Intensidad para 1mg/mL ß-LG en el NaCl 4.5mM en pH 4,2 en el tiempo = 0.

La población más tamaño pequeño tiene un diámetro hidrodinámico circa de 5.4nm. Usando una masa sabida comparado con el lazo de la talla para las proteínas globulares, mostrado en la Ecuación 1, el peso molecular de la proteína 5.4nm es el kDa aproximadamente 35, constante con el formulario dimérico de la proteína de ß-LG.

El trazo cinético para el experimento se muestra en el Cuadro 2, que muestra el diámetro del intensidad y Z-Medio en función de tiempo experimental.

Cuadro 2. trazo Cinético de 1.0mg/mL ß-LG en el NaCl 4.5mM en pH 4,2.

La intensidad el dispersar es áspero proporcional a la concentración y al cuadrado del peso molecular, y es por lo tanto muy sensible a la formación de agregados más de categoría alta. El diámetro Z-Medio es el diámetro medio del conjunto de partículas, y se deriva del declive del formulario linearizado de la función de correlación (método de los Cumulantes). Como se ve en el Cuadro 2, la formación del agregado más de categoría alta ocurre en los primeros 20-25 minutos del experimento. En horas más largas, la intensidad el dispersar es relativamente constante, sugiriendo que se ha logrado el equilibrio del dimero-agregado. La Estabilización del agregado más de categoría alta en horas más largas es también evidente en el Cuadro 3, que muestra a intensidad seleccionada las distribuciones dimensionales del experimento cinético.

El Cuadro 3. Seleccionó las distribuciones dimensionales de la intensidad del experimento cinético de ß-LG.

Una disminución del periodo relativo del dimero también fue observada sobre el curso del tiempo del experimento. En las condiciones iniciales, mostradas en el Cuadro 1, la concentración del dimero explicó el 80% de la intensidad el dispersar. Al final de la corrida experimental, la contribución a dispersar intensidad por el dimero se había estabilizado en el áspero 10% del total (véase el Cuadro 4). Como se ve en el Cuadro 4, un aumento en dispersar la estabilización de la intensidad y de la talla del agregado estupendo se podía también considerar en un cierto plazo. La intensidad el dispersar del agregado creciente a partir de la 20% hasta el 90% durante la corrida, con la talla del agregado estabilizado final en aproximadamente 425nm.

Cuadro 4. distribuciones dimensionales de la intensidad Dependiente del tiempo para ß-LG en el NaCl 4.5mM en pH 4,2.

Nota: Un filete completo de referencias está disponible refiriendo al documento original.

Fuente: “Agregación de la β-Lactoglobulina”, Nota de Aplicación por los Instrumentos de Malvern.

Para más información sobre esta fuente visite por favor Malvern Instruments Ltd (REINO UNIDO) o los Instrumentos de Malvern (los E.E.U.U.).

Date Added: May 9, 2005 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 13. June 2013 01:48

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