Aiheet
Tausta
Kokeellinen
Näytteiden esikäsittely
Määrittäminen Hiukkaskoko
Tulokset
Tausta
Vuonna 1934, Palmer ensimmäinen kuvattu erottaminen SS-Lactoglobulin (SS-LG) päässä hera murto Naudanmaidon. Tämä löytö tehtiin viisikymmentä vuotta ennen varsinaista rakennetta voitaisiin selvitetty kautta röntgenkristallografia .. Useimmissa näistä tutkimuksista keskittyvät lämmön aiheuttama aggregaatiota koska tämä on erittäin kiinnostava ja tärkeä käsittelyyn maitotuotteita. Huolimatta vuosien tutkimusta, tietty toiminto SS-Lactoglobulin on vielä täysin tunneta. Tämän työn tarkoituksena on tarjota tutkimuksen SS-LG sähköstaattinen aggregaatiota alhainen ionivahvuuden (I) ja pH-arvot alle Isoelektrinen piste (PI), jossa yhdistäminen tapahtuu hidas tarpeeksi arvioidaan lähes elastinen valo sironta (QELS).
Kokeellinen
Näytteiden esikäsittely
SS-LG & B, ostettu Sigma-Aldrich ja käyttää ilman lisäpuhdistusta, purettiin 4.5mm NaCl valmistetaan Milli-Q vettä. Liuenneet SS-Lg oli sitten nostettiin pH 9, jotta erottaa proteiinin sen monomeerisiä lajeja. Suuri tilavuus 4,5 NaCl oli valmis sisältää sopiva määrä 0,1 M HCl tuoda yhdessä ratkaisuja tavoite pH ja keskittyminen 4.2 ja 1mg/ml vastaavasti. Molemmat ratkaisut oli suodatettu (0,2 mikrometriä suodattimet, Sartorius AG, Saksa), ja sitten sekoitetaan välittömästi ennen analyysiä.
Määrittäminen Hiukkaskoko
Koko jakaumat SS-LG aggregaatit määritetään Malvern Zetasizer Nano ZS . Korrelaatio kertaa seitsemän sekuntia per ajaa ja kolme ajoa per mittaus. QELS avulla selvitettiin koko jakaumien yli viisikymmentä minuuttia.
Tulokset
Kuvassa 1 intensiteetti kokojakauma kerätty kineettisen kokeen ajankohtana (t) = 0. Kuten ilmeistä tässä, QELS tulokset osoittavat, että SS-LG aggregaatit kaksi erillistä koko väestön lähes välittömästi.
Kuva 1. Intensiteetti kokojakauma varten 1mg/ml SS-Lg on 4.5mm NaCl pH 4,2 hetkellä = 0.
Pienempi koko väestö on hydrodynaaminen halkaisijaltaan noin 5.4nm. Käyttämällä tunnettu massa vs. koon suhde pallomainen proteiineja, yhtälössä 1 esitetyllä tavalla, molekyylipaino 5.4nm proteiini on noin 35 kDa, sopusoinnussa dimeerinen muodossa SS-Lg proteiinia.
Kineettinen jäljittää kokeilua varten on esitetty kuvassa 2, joka osoittaa intensiteetti ja Z-keskimääräinen halkaisija funktiona kokeellista aikaa.
Kuva 2. Kinetic jälkeäkään 1.0mg/mL SS-Lg on 4.5mm NaCl pH 4,2.
Sironta intensiteetti on suunnilleen verrannollinen pitoisuus ja neliön molekyylipaino, ja on siksi varsin herkkä muodostumista korkeammat aggregaatit. Z-keskimääräinen halkaisija on keskimääräinen halkaisija kokonaisuus hiukkasia, ja on johdettu kaltevuus linearisoidun muodossa korrelaatiokerroin (Cumulants menetelmä). Kuten kuvassa 2, muodostumista korkeammat yhteenlaskettu esiintyy ensimmäisen 20-25 minuutin kokeilun. At pitempi, sironta intensiteetti on suhteellisen vakaa, mikä viittaa siihen, että dimeeri-aggregaatin tasapainotila on saavutettu. Vakauttaminen korkeammat yhteenlaskettu milloin pitempi näkyy myös kuvassa 3, jossa esitetään valittujen voimakkuus koko jaettavia kineettinen kokeilu.
Kuva 3. Valittu teho koko jaettavia SS-Lg kineettisen kokeilu.
Suhteellinen lasku määrää dimeerin havaittiin myös ajoittain kuluessa kokeen. Tällä alkuehdot, kuvassa 1, dimeeriä pitoisuus oli 80% sironnan intensiteetin. Päätteeksi kokeellisen aikavälillä vaikutus sirontaa intensiteettiä dimeerin oli vakiintunut noin 10% kaikista (katso kuva 4). Kuten kuvassa 4, lisäys sironnan voimakkuus ja koko vakauttaminen Super yhteenlaskettu näkyi myös ajan mittaan. Sironnan intensiteetti yhteenlaskettu kasvoi 20%: sta 90% juoksun aikana, ja koko yhteenlaskettu lopulta vakiintui noin 425nm.
Kuva 4. Aika riippuu intensiteetti koko jakaumat SS-Lg on 4.5mm NaCl pH 4,2.
Huom: täydellinen lähdeluettelo löytyy viittaamalla alkuperäiseen asiakirjaan.
Lähde: "yhdistäminen β-Lactoglobulin", Application Note by Malvern Instruments.
Lisätietoja tästä lähde osoitteessa Malvern Instruments Ltd (Yhdistynyt kuningaskunta) tai Malvern Instruments (USA) .