Totalisation Électrostatique d'â-Lactoglobuline Utilisant la Dispersion de la Lumière Quasi-Électrique par Malvern

Sujets Couverts

Mouvement Propre
Expérimental
     Préparation des Échantillons
     Détermination de Dimension Particulaire
Résultats

Mouvement Propre

En 1934, Palmer a décrit la première fois la séparation de la ß-Lactoglobuline (ß-Atterrisseur) de la fraction de petit lait du lait de vache. Cette découverte a été effectuée cinquante ans avant que la structure réelle pourrait être élucidée par la cristallographie de Rayon X. La majorité de ces derniers étudie le centre autour de la totalisation provoquée par la chaleur puisque c'est d'intérêt et d'importance grands pour le traitement des produits laitiers. En Dépit des années de la recherche, le fonctionnement particulier de la ß-Lactoglobuline doit être complet compris encore. Le but de ce travail est de fournir une étude de la totalisation ß-Atterrisseur électrostatique à la concentration ionique faible (i) et aux valeurs du pH ci-dessous la remarque isoélectrique (pI) où la totalisation se produit à des tarifs assez lents pour être évaluée par la dispersion de la lumière quasiélastique (QELS).

Expérimental

Préparation des Échantillons

ß-Atterrisseur A&B, acheté du Sigma Aldrich et utilisé sans davantage de purification, a été dissous en NaCl de 4.5mM préparé à partir de l'eau de Milli-Q. Le ß-Atterrisseur dissous a été alors augmenté à pH 9 afin de dissocier la protéine dans sa substance monomérique. Un volume égal de NaCl de 4.5mM a été préparé contenant la quantité appropriée de HCL de 0.1M pour porter les solutions combinées à l'objectif pH et à la concentration de 4,2 et de 1mg/mL respectivement. Les Deux solutions ont été filtrées (0,2 filtres de µm, Sartorius AG, Allemagne), et puis mélangées immédiatement avant l'analyse.

Détermination de Dimension Particulaire

Les distributions de Grandeurs des agrégats ß-Atterrisseur étaient déterminées utilisant le Nano ZS de Malvern Zetasizer. Les temps de Corrélation étaient de sept secondes selon le passage et trois passages selon la mesure. QELS a été employé pour déterminer des distributions de grandeurs plus de cinquante mn.

Résultats

Le Schéma 1 affiche la distribution de grandeurs d'intensité rassemblée pendant l'expérience cinétique au temps (t) = 0. Comme évident ici, les résultats de QELS indiquent cela, les agrégats ß-Atterrisseur dans deux populations distinctes de taille presque immédiatement.

Le Schéma 1. distribution de grandeurs d'Intensité pour ß-Atterrisseur 1mg/mL en NaCl de 4.5mM à pH 4,2 au temps = 0.

La population plus de petite taille a un diamètre hydrodynamique de vers 5.4nm. Utilisant une masse connue contre la relation de taille pour les protéines globulaires, affichée dans l'Équation 1, le poids moléculaire de la protéine 5.4nm est approximativement 35 kDa, compatibles avec la forme dimère de la protéine ß-Atterrisseur.

La trace cinétique pour l'expérience est affichée sur le Schéma 2, qui affiche le diamètre d'intensité et Z-Moyen en fonction du temps expérimental.

Le Schéma 2. trace Cinétique de ß-Atterrisseur 1.0mg/mL en NaCl de 4.5mM à pH 4,2.

L'intensité de dispersion est rugueux proportionnelle à la concentration et au carré du poids moléculaire, et est par conséquent tout à fait sensible à la formation des agrégats évolués. Le diamètre Z-Moyen est le moyen diamètre de l'ensemble de particules, et est dérivé de la pente de la forme linéarisée du fonctionnement de corrélation (méthode de Cumulants). Comme vu sur le Schéma 2, la formation de l'agrégat évolué se produit dans 20-25 premières mn de l'expérience. À de plus longues heures, l'intensité de dispersion est relativement constante, suggérant que l'équilibre de dimère-agrégat ait été réalisé. La Stabilisation de l'agrégat évolué à de plus longues heures est également évidente sur le Schéma 3, qui affiche des distributions de grandeurs sélectées d'intensité de l'expérience cinétique.

Le Schéma 3. A Sélecté des distributions de grandeurs d'intensité à partir de l'expérience ß-Atterrisseur cinétique.

On a également observé une diminution de la quantité relative de dimère au-dessus du cours de temps de l'expérience. Aux conditions initiales, représentées sur le Schéma 1, la concentration en dimère a représenté 80% de l'intensité de dispersion. À la conclusion du passage expérimental, la cotisation à disperser l'intensité par le dimère avait stabilisé approximativement à 10% du total (voir le Schéma 4). Comme vu sur le Schéma 4, une augmentation de disperser l'intensité et la stabilisation de taille de l'agrégat superbe a pu également être vue au fil du temps. L'intensité de dispersion de l'agrégat accru de 20% à 90% pendant le passage, avec la taille de l'agrégat éventuel stabilisé environ à 425nm.

Le Schéma 4. distributions de grandeurs Dépendant du temps d'intensité pour ß-Atterrisseur en NaCl de 4.5mM à pH 4,2.

Note : Une liste complète de références est disponible en se rapportant au document original.

Source : « Totalisation de β-Lactoglobuline », Note d'Application par des Instruments de Malvern.

Pour plus d'informations sur cette source visitez s'il vous plaît Malvern Instruments Ltd (R-U) ou les Instruments de Malvern (ETATS-UNIS).

Date Added: May 9, 2005 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 13. June 2013 01:22

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