Malvern 著疑似電気光散乱を使用して â ラクトグロブリンの静電気の集合

カバーされるトピック

背景
実験
     サンプル準備
     粒度の決定
結果

背景

1934 年に、 Palmer は最初に牛のようなミルクの乳しようの一部分からの ß ラクトグロブリン (ß Lg) の分離を記述しました。 この発見は実際の構造が X 線の結晶学によって明瞭にすることができる 50 年前になされました。 これらの大半は熱によって誘導される集合のまわりでこれが乳製品の処理にとっての大きい興味および重要性をもつので中心を調査します。 研究の年にもかかわらず、 ß ラクトグロブリンの特定の機能はまだ完全に理解されるべきです。 この作業の目的は集合が準弾性光散乱によって評価されるには十分に遅いレートに発生する等電ポイントの下で低いイオン (pI)強さ (i) と水素イオン濃度指数で ß Lg 静電気の集合の調査を提供することです (QELS)。

実験

サンプル準備

シグマ Aldrich から購入され、それ以上の浄化なしで使用された ß Lg A&B は Milli-Q 水から準備された 4.5mM NaCl で分解しました。 分解された ß Lg は pH 9 にそれから単量体種に蛋白質を引き離すために上がりました。 ターゲット pH および 4.2 およびそれぞれ 1mg/mL の集中に結合された解決を持って来るために 0.1M HCl の適切な量を含んでいる 4.5mM NaCl の等しいボリュームは準備されました。 解決は両方とも (0.2 の µm フィルター、 Sartorius AG、ドイツ) フィルタに掛け、次に分析前にすぐに混合されました。

粒度の決定

ß Lg 総計のサイズ分布は Malvern Zetasizer Nano ZS を使用して断固としたでした。 相関関係の時間は測定ごとの実行そして 3 つの実行ごとの 7 秒でした。 QELS が 50 分にわたるサイズ分布を定めるのに使用されました。

結果

図 1 は時間 (t) に運動実験の間に集められる強度のサイズ分布を = 0 示します。 明白ようにここに、 QELS の結果はそれをの 2 人の個別のサイズの人口の ß Lg 総計ほとんどすぐに明記します。

時間の pH 4.2 の 4.5mM NaCl の 1mg/mL ß Lg のための図 1. 強度のサイズ分布 = 0。

小型の人口は 5.4nm 頃の流体力学の直径があります。 知られていた大容量を使用して対同等化 1 で示されている球状蛋白質のためのサイズ関係 5.4nm 蛋白質の分子量は ß Lg 蛋白質の二量体形式に一貫したおよそ 35 kDa です。

実験のための運動トレースは実験時間の機能として強度そして Z 平均直径を示す図 2 で示されています。

図 2. pH 4.2 の 4.5mM NaCl の 1.0mg/mL ß Lg の運動トレース。

分散の強度は分子量の集中そして正方形にほぼ比例して、それ故に高位総計の形成にかなり敏感です。 Z 平均直径は粒子のアンサンブルの中間の直径で、相関関数 (Cumulants 方法) の一直線に並べられた形式の斜面から得られます。 図 2 に見られるように、高位総計の形成は実験の最初の 20-25 分に発生します。 長い時間で、分散の強度は比較的一定して、二量体総計の平衡が達成されたことを提案します。 長い時間の高位総計の安定は運動実験からの指定強度のサイズ分布を示す図 3 でまた明白です。

図 3. は ß Lg 運動実験から強度のサイズ分布を選びました。

二量体の相対的な量の減少はまた実験の時間のコースに観察されました。 図 1 で示されている最初の条件で二量体の集中は分散の強度の 80% を占めました。 実験実行の終了時点で、二量体によって強度を分散させることへの貢献は合計の大体 10% で安定しました (図 4) を見て下さい。 図 4 に見られるように、極度の総計の強度およびサイズ安定の分散の増加はまた一定時間にわたり見ることができます。 最終的におよそ 425nm で安定する総計のサイズの実行の間に 20% から 90% まで、高められる総計の分散の強度。

pH 4.2 の 4.5mM NaCl の ß Lg のための図 4. 時間依存の強度のサイズ分布。

注: 参照の完全なリストは原書を示すことによって使用できます。

ソース: 「βラクトグロブリンの集合」、 Malvern の器械によるアプリケーションノート。

このソースのより多くの情報のために Malvern の器械株式会社 (イギリス) または Malvern の器械 (米国) を訪問して下さい。

Date Added: May 9, 2005 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 13. June 2013 01:30

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