Elektrostatische Samenvoeging van â-lactoglobuline die hetElektrische Lichte Verspreiden Gebruiken zich door Malvern

Besproken Onderwerpen

Achtergrond
Experimenteel
     De Voorbereiding van de Steekproef
     Bepaling van de Grootte van het Deeltje
Resultaten

Achtergrond

In 1934, beschreef Palmer eerst de scheiding van ß-lactoglobuline (ß-LG) van de weifractie van rundermelk. Deze ontdekking werd gemaakt vijftig jaar alvorens de daadwerkelijke structuur door de kristallografie van de Röntgenstraal zou kunnen worden nader toegelicht. De meerderheid van deze studies centreert rond hitte veroorzaakte samenvoeging aangezien dit van duidelijk belangstelling en belang aan de verwerking van zuivelproducten is. Ondanks de jaren van onderzoek, de specifieke functie van ß-lactoglobuline nog is zich volledig te begrijpen. Het doel van dit werk is een studie van elektrostatische samenvoeging ß-LG bij lage Ionische sterkte (i) en bij pH waarden onder het isoelectric punt te verstrekken (pI) waar de samenvoeging aan een tarief langzaam genoeg voorkomt om door zich quasi-elastic lichte te verspreiden worden geëvalueerd (QELS).

Experimenteel

De Voorbereiding van de Steekproef

ß-LG A&B, van Sigma Aldrich wordt en zonder verdere die reiniging wordt gebruikt gekocht die, werd in NaCl 4.5mM opgelost van water dat milli-Q wordt voorbereid. Opgelost ß-LG werd toen opgeheven aan pH 9 om de proteïne in zijn monomeric species te scheiden. Een gelijk volume van NaCl 4.5mM werd voorbereid bevattend de aangewezen hoeveelheid 0.1M HCl om de gecombineerde oplossingen aan het doel pH en concentratie van 4.2 en respectievelijk 1mg/mL te brengen. Beide oplossingen werden gefiltreerd (0.2 µm filters, Sartorius AG, Duitsland), en werden toen gemengd onmiddellijk voorafgaand aan analyse.

Bepaling van de Grootte van het Deeltje

Distributies van de Grootte van de complexen ß-LG werden bepaald gebruikend Malvern Zetasizer Nano ZS. Tijden van de Correlatie waren zeven seconden per looppas en drie looppas per meting. QELS werd gebruikt om groottedistributies te bepalen meer dan vijftig minuten.

Resultaten

Figuur 1 toont de distributie van de intensiteitsgrootte tijdens het kinetische experiment in tijd (t) wordt verzameld = 0 die. Zoals duidelijk hier, wijzen de resultaten QELS erop dat, ß-LG in twee verschillende groottebevolking bijna onmiddellijk bijeenvoegt.

Figuur 1. De groottedistributie van de Intensiteit voor ß-LG 1mg/mL in NaCl 4.5mM bij pH 4.2 in tijd = 0.

De kleinere groottebevolking heeft een hydrodynamische diameter van circa 5.4nm. Gebruikend een bekende massa versus grootteverhouding voor bolvormige die proteïnen, in Vergelijking 1 worden getoond, is het moleculegewicht van de 5.4nm proteïne kDa ongeveer 35, verenigbaar met de vorm met twee delen van de proteïne ß-LG.

Het kinetische spoor voor het experiment wordt getoond in Figuur 2, die de intensiteit en de z-Gemiddelde diameter als functie van experimentele tijd toont.

Figuur 2. Kinetisch spoor van ß-LG 1.0mg/mL in NaCl 4.5mM bij pH 4.2.

De verspreidende intensiteit is ruwweg evenredig aan de concentratie en het vierkant van het moleculegewicht, en is vandaar vrij gevoelig voor de vorming van hogere ordecomplexen. De z-Gemiddelde diameter is de gemiddelde diameter van het ensemble van deeltjes, en geleid uit de helling van de gelineariseerde vorm van de correlatiefunctie af (Cumulants methode). Zoals gezien in Figuur 2, komt de vorming van het hogere ordecomplex in de eerste 20-25 minuten van het experiment voor. In langere tijden, is de verspreidende intensiteit vrij constant, voorstellend dat het dimeer-gezamenlijke evenwicht is bereikt. De Stabilisatie van het hogere ordecomplex in langere tijden is ook duidelijk in Figuur 3, die de geselecteerde distributies van de intensiteitsgrootte van het kinetische experiment toont.

Figuur 3. De Geselecteerde distributies van de intensiteitsgrootte van het kinetische experiment ß-LG.

Een daling van de relatieve hoeveelheid dimeer werd ook waargenomen over de tijdcursus van het experiment. Bij de aanvankelijke die voorwaarden, in Figuur 1 worden getoond, vertegenwoordigde de dimeerconcentratie 80% van de verspreidende intensiteit. Bij de conclusie van de experimentele looppas, had de bijdrage tot het verspreiden van intensiteit door het dimeer bij ruwweg 10% van het totaal (zie Figuur 4) gestabiliseerd. Zoals gezien in Figuur 4, kon een verhoging van het verspreiden van intensiteit en groottestabilisatie van het super complex ook in tijd worden gezien. De verspreidende die intensiteit van het complex steeg van 20% tot 90% tijdens de looppas, met de grootte van het complex uiteindelijk bij ongeveer 425nm wordt gestabiliseerd.

Figuur 4. Distributies van de de intensiteitsgrootte van de Tijd de afhankelijke voor ß-LG in NaCl 4.5mM bij pH 4.2.

Nota: Een volledige lijst van verwijzingen is beschikbaar door naar het oorspronkelijke document te verwijzen.

Bron: „Samenvoeging van β-lactoglobuline“, de Nota van de Toepassing door Malvern Instruments.

Voor meer informatie over deze bron te bezoeken gelieve Instrumenten Malvern Instruments Ltd (het UK) of Malvern (de V.S.).

Date Added: May 9, 2005 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 13. June 2013 01:19

Ask A Question

Do you have a question you'd like to ask regarding this article?

Leave your feedback
Submit