Электростатическое Комплексирование â-Лактоглобулина Используя Quasi-Электрический Светлый Разбрасывать Malvern

Покрытые Темы

Предпосылка
Экспириментально
     Подготовка Образца
     Определение Размера Частицы
Результаты

Предпосылка

В 1934, Palmer сперва описал разъединение ß-Лактоглобулина (ß-Lg) от части whey bovine молока. Это открытие было сделано 50 лет прежде чем фактическая структура смогла быть разъяснена через кристаллографию Рентгеновского Снимка. Большинство этих изучает центр вокруг комплексирования наведенного жарой в виду того что это представил интерес большой интерес и важность к обрабатывать молочных продучтов. Несмотря На леты исследования, специфическая функция ß-Лактоглобулина пока вполне быть понятым. Цель этой работы обеспечить изучение электростатического комплексирования ß-Lg на низкой ионной прочности (I) и на значениях пэ-аш под изоэлектрическим пунктом (pI) где комплексирование происходит на тарифе медленном достаточно быть оцененным quasi-эластичный светлый разбрасывать (QELS).

Экспириментально

Подготовка Образца

ß-Lg A&B, закупленный от Сигмы Aldrich и использованный без более дальнеишего очищения, был растворен в NaCl 4.5mM подготовленном от воды Milli-Q. Растворенный ß-Lg после этого был поднят к пэ-аш 9 для того чтобы disassociate протеин в свой односегментный вид. Был подготовлен равный том NaCl 4.5mM содержа соотвествующее количество HCl 0.1M для того чтобы принести совмещенные разрешения к пэ-аш цели и концентрации 4,2 и 1mg/mL соответственно. Оба разрешения были фильтрованы (0,2 фильтра µm, Sartorius AG, Германию), и после этого были смешаны немедленно до анализа.

Определение Размера Частицы

Распределения по размеру компоситов ß-Lg были решительно используя Malvern Zetasizer Nano ZS. Времена Корреляции были 7 секунд в бег и 3 бега в измерение. QELS было использовано для того чтобы определить распределения по размеру над 50 минутами.

Результаты

На Диаграмму 1 показано распределение по размеру интенсивности собранное во время кинетического эксперимента на времени (t) = 0. Как очевидно здесь, результаты QELS показывают то, компоситы ß-Lg в 2 определенных населенностях размера почти немедленно.

Диаграмма 1. распределение по размеру Интенсивности для 1mg/mL ß-Lg в NaCl 4.5mM на пэ-аш 4,2 на времени = 0.

Более малая населенность размера имеет гидродинамический диаметр около 5.4nm. Используя известную массу против отношения размера для шаровидных протеинов, показанного в Уровнении 1, молекулярный вес протеина 5.4nm kDa приблизительно 35, последовательное с димерной формой протеина ß-Lg.

Кинетический след для эксперимента показан в Диаграмме 2, на которую показано диаметр интенсивности и Z-Средних как функция экспириментально времени.

Диаграмма 2. Кинетический след 1.0mg/mL ß-Lg в NaCl 4.5mM на пэ-аш 4,2.

Интенсивность разбрасывать грубо пропорциональна к концентрации и квадрату молекулярного веса, и следовательно довольно чувствительна к образованию компоситов высшийо порядок. Z-Средний диаметр средний диаметр ансамбля частиц, и выведен от наклона линеаризованной формы функции корреляции (метода Cumulants). Как замечено в Диаграммы 2, образование компосита высшийо порядок происходит в первых 20-25 минутах эксперимента. На более длинних временах, интенсивность разбрасывать относительно постоянн, предлагающ что уравновешение димер-компосита было достигано. Стабилизация компосита высшийо порядок на более длинних временах также очевидна в Диаграмме 3, на которую показано выбранные распределения по размеру интенсивности от кинетического эксперимента.

Диаграмма 3. Выбрала распределения по размеру интенсивности от кинетического эксперимента ß-Lg.

Уменшение в относительном количестве димера также наблюдалось над ходом опыта времени. На начальных условиях, показанных в Диаграмме 1, концентрация димера определила 80% из интенсивности разбрасывать. В завершении экспириментально бега, вклад к разбрасывать интенсивность димером стабилизировал на грубо 10% из итога (см. Диаграмму 4). Как замечено в Диаграммы 4, увеличение в разбрасывать стабилизацию интенсивности и размера супер компосита смогло также быть увидено над временем. Интенсивность разбрасывать компосита увеличенного от 20% до 90% во время бега, с размером компосита в конечном счете стабилизированного на приблизительно 425nm.

Диаграмма 4. распределения по размеру интенсивности Времени зависимых для ß-Lg в NaCl 4.5mM на пэ-аш 4,2.

Примечание: Полный список справок доступен путем ссылаться к подлинному документу.

Источник: «Комплексирование β-Лактоглобулина», Примечание по Применению Аппаратурами Malvern.

Для больше информации на этом источнике пожалуйста посетите Аппаратуры Ltd Malvern (ВЕЛИКОБРИТАНИЮ) или Аппаратуры Malvern (США).

Date Added: May 9, 2005 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 13. June 2013 01:45

Ask A Question

Do you have a question you'd like to ask regarding this article?

Leave your feedback
Submit