Рассматриваемые вопросы
Фон
Экспериментальный
Подготовка образцов
Определение размеров частиц
Результаты
Фон
В 1934 году Палмер впервые описал разделение ß-лактоглобулина (SS-Lg) из сыворотки долю коровьего молока. Это открытие было сделано за пятьдесят лет до реальной структуры могут быть выяснены путем рентгеновской кристаллографии .. Большинство из этих исследований центр, вокруг тепло индуцированной агрегации, так как это представляет большой интерес и важность для переработки молочной продукции. Несмотря на годы исследований, конкретные функции ß-лактоглобулина до сих пор не выяснен. Целью данной работы является обеспечение изучения бета-Lg электростатического агрегации при низкой ионной силе (I) и при значениях рН ниже изоэлектрической точки (PI), где агрегации происходит со скоростью достаточно медленно, чтобы быть оценены квазиупругого свет рассеяния (QELS).
Экспериментальный
Подготовка образцов
ß-Lg & B, приобретенных у Sigma-Aldrich и использовали без дополнительной очистки, растворяли в 4,5 мм NaCl приготовленный из Milli-Q воды. Растворенного ß-Lg тогда подняли до рН 9 для того, чтобы дистанцироваться белка в своей мономерной видов. Равным объемом 4,5 мм NaCl была подготовлена содержащая соответствующую сумму 0,1 М HCl принести комбинированные решения для рН цели и концентрации 4,2 и 1mg/mL соответственно. Оба решения были отфильтрованы (0,2 мкм фильтры Sartorius AG, Германия), а затем смешиваются непосредственно перед анализом.
Определение размеров частиц
Размер распределения бета-Lg агрегатов определяли с помощью Malvern Zetasizer Nano ZS . Времена корреляции было семь секунд запуска и работает в три измерения. QELS был использован для определения размера дистрибутивов более пятидесяти минут.
Результаты
На рисунке 1 показано распределение интенсивности Размер собранных в ходе кинетических экспериментов в момент времени (т) = 0. Как видно здесь, QELS результаты показывают, что бета-Lg агрегатов в двух различных популяций размером почти сразу.
Рисунок 1. Интенсивность распределения по размерам для 1mg/mL ß-Lg в 4,5 мм NaCl при рН 4,2 в момент = 0.
Меньшего размера населения гидродинамическим диаметром около 5.4nm. Использование известной массы по сравнению с размером отношений для глобулярных белков, показано в формуле 1, молекулярная масса белка 5.4nm составляет приблизительно 35 кДа, в соответствии с димерной форме бета-Lg белка.
Кинетическая трассировки для эксперимента приведена на рисунке 2, который показывает интенсивность и Z-средний диаметр в зависимости от времени эксперимента.
Рисунок 2. Кинетическая следов 1.0mg/mL ß-Lg в 4,5 мм NaCl при рН 4,2.
Интенсивности рассеяния примерно пропорционально концентрации и квадрату молекулярной массы, и, следовательно, весьма чувствительны к образованию высших агрегатов порядке. Z-средний диаметр средний диаметр ансамбль частиц, и является производным от наклона линеаризованной форме корреляционной функции (кумулянтов метод). Как видно на рисунке 2, образование более высокого порядка совокупности происходит в первые 20-25 минут эксперимента. На более длительное время, интенсивность рассеяния относительно постоянной, предполагая, что димер-агрегата равновесие было достигнуто. Стабилизация высокого порядка совокупности не более длительное время также очевидно на рисунке 3, который показывает интенсивность выбранного размера распределений из кинетического эксперимента.
Рисунок 3. Выбранный размер интенсивность распределения из бета-Lg кинетической эксперимента.
Уменьшение относительного количества димеров наблюдалась также за время хода эксперимента. На начальных условиях, как показано на рисунке 1, концентрация димера составила 80% от интенсивности рассеяния. По окончании экспериментального запуска вклад в интенсивность рассеяния димера стабилизировался на уровне примерно 10% от общего объема (см. рисунок 4). Как видно на рисунке 4, увеличение интенсивности рассеяния и размера стабилизации супер агрегат может также рассматриваться в течение долгого времени. Интенсивности рассеяния совокупности увеличилось с 20% до 90% в перспективе, с размером совокупного конечном итоге стабилизировался на уровне около 425nm.
Рисунок 4. Зависящие от времени интенсивность распределения размеров для ß-Lg в 4,5 мм NaCl при рН 4,2.
Примечание: полный список литературы можно получить, обратившись к исходному документу.
Источник: "агрегации β-лактоглобулина", Приложение Записка инструменты Малверн.
Для получения дополнительной информации на этот источник пожалуйста, посетите Malvern Instruments Ltd (Великобритания) или Malvern Instruments (США) .