Elektrostatisk Aggregation av â-Lactoglobulin genom Att Använda Quasi-Elkraft Lätt Spridning vid Malvern

Täckte Ämnen

Bakgrund
Experimentellt
     Ta Prov Förberedelsen
     Beslutsamhet av Partikeln Storleksanpassar
Resultat

Bakgrund

I 1934 beskrev Palmer först avskiljandet av ß-Lactoglobulin (ß-Lg) från wheyen del av nötkreaturs- mjölkar. Denna upptäckt gjordes, femtio år för det faktiskt strukturerar kunde belysas Röntgar igenom crystallography. Majoriteten av dessa studier centrerar värmer omkring framkallad aggregation, sedan denna är av store intresserar och betydelse till bearbeta av mejeriprodukter. Illviljan åren av forskning, närmare detalj fungerar av ß-Lactoglobulin ska ännu fullständigt förstås. Ämna av detta arbete är att ge en studie av elektrostatisk aggregation ß-Lg på låg ionic styrka (I) och på pH värderar nedanfört det isoelectric pekar (pI) var aggregation uppstår på en klassa som är långsam nog för att utvärderas av quasi-resår lätt spridning (QELS).

Experimentellt

Ta Prov Förberedelsen

ß-Lg A&B som inhandlades från Sigmaen Aldrich och användes utan mer ytterligare purification, upplöstes i 4.5mM som NaCl som är förberedd från Milli-Q, bevattnar. Den upplöst ß-Lgen lyfttes därefter till pH 9 för att disassociate proteinet in i dess monomeric art. En jämbördig volym av 4.5mM NaCl var förberedd innehålla anslåbeloppet av 0.1M HCl för att komma med de kombinerade lösningarna till uppsätta som mål pH och koncentration av 4,2 och 1mg/mL respektive. Båda lösningar filtrerades (0,2 µm filtrerar, Sartorius AG, Tyskland), och därefter blandat omgående före analys.

Beslutsamhet av Partikeln Storleksanpassar

Storleksanpassa fördelningor av aggregaten ß-Lg var beslutsamt genom att använda Malvernen Zetasizer Nano ZS. Korrelationen som tider var sju, understöder per körning och tre körningar per mätning. QELS var van vid bestämmer storleksanpassar fördelningor över femtio noterar.

Resultat

Figurera shows 1 som styrkan storleksanpassar fördelning samlade under det kinetic experiment på tid (t) = 0. Som tydligt här, indikerar QELS-resultaten det, ß-Lg samlar itu distinkt storleksanpassar befolkningar nästan omgående.

Figurera 1. Styrka storleksanpassar fördelning för 1mg/mL ß-Lg i 4.5mM NaCl på pH 4,2 på tid = 0.

De mindre storleksanpassar befolkningen har en hydrodynamic diameter av circa 5.4nm. Genom Att Använda ett bekant samlas vs. storleksanpassar förhållandet för klotformiga proteiner som visas i Likställande 1, det molekylärt, väger av proteinet 5.4nm är kDa som ungefärligt 35 är jämn med det dimeric, bildar av proteinet ß-Lg.

Den kinetic tracen för experiment visas in Figurerar 2, som visar styrkan och denGenomsnitt diametern som en fungera av experimentell tid.

Figurera 2. Kinetic trace av 1.0mg/mL ß-Lg i 4.5mM NaCl på pH 4,2.

Spridningstyrkan är ungefärligt proportionell till koncentrationen, och kvadrera av det molekylärt väger och är ganska känslig till bildandet av higher beställer hence aggregat. Z-Genomsnittet diametern är den genomsnittliga diametern av helheten av partiklar och härledas från slutta av linearized bildar av korrelationen fungerar (Cumulantsmetoden). Som sett in Figurera 2, bildandet av det högre beställer aggregat uppstår i den första 20en-25 noterar av experiment. På längre tider är spridningstyrkan förhållandevis konstanten som föreslår att dimer-aggregat equilibrium har uppnåtts. Stabilisering av det högre beställer aggregat på längre tider är också tydlig Figurerar in 3, som utvald styrka för shows storleksanpassar fördelningor från det kinetic experiment.

Figurera 3. Utvald styrka storleksanpassar fördelningor från det kinetic experiment ß-Lg.

En minskning i släktingbeloppet av dimer observerades också över tiden jagar av experiment. På det initialt villkorar, visat in Figurerar 1, dimerkoncentrationen som redogöras för 80% av spridningstyrkan. På avslutningen av den experimentella körningen hade bidraget till spridningstyrka vid dimeren stabiliserat på ungefärligt 10% av slutsumman (se för att Figurera 4). Som sett in Figurera 4, en förhöjning i spridningstyrka och storleksanpassa stabilisering av det toppna aggregat kunde också ses med tiden. Spridningstyrkan av aggregat ökande från 20% till 90% under körningen, med storleksanpassa av aggregat som stabiliseras ultimately på ungefärligt 425nm.

Figurera 4. Time anhörigstyrka storleksanpassar fördelningor för ß-Lg i 4.5mM NaCl på pH 4,2.

Notera: Ett färdigt listar av hänvisar till är tillgängligt, genom att se till det original- dokumentet.

Källa: ”Noterar Aggregation av β-Lactoglobulin”, Applikationen vid Malvern Instrumenterar.

För mer information på denna källa behaga besök Malvern Instrumenterar AB (UK), eller Malvern Instrumenterar (USA).

Date Added: May 9, 2005 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 13. June 2013 01:51

Ask A Question

Do you have a question you'd like to ask regarding this article?

Leave your feedback
Submit