â 乳球蛋白质的静电汇总使用类似电光散射的 Malvern

包括的事宜

背景
实验
     范例准备
     颗粒大小的确定
结果

背景

在 1934年,帕尔默首先描述了 ß 乳球蛋白质 (ß Lg) 的分隔从牛牛奶的乳清分数。 五十年,在这个实际结构可能通过 X-射线结晶学,被阐明此发现做。前。 因为这是极大的利益和重要性对处理奶制品,这些的大部分在热导致的汇总附近学习中心。 尽管岁月研究, ß 乳球蛋白质的特定功能将完全地了解。 此工作的目的将提供 ß Lg 静电汇总的研究在低离子强度 (i) 和在 PH 值在汇总发生 (pI)以足够慢的费率通过准弹性光散射评估的等电位点下 (QELS)。

实验

范例准备

ß Lg A&B,采购从斯格码 Aldrich 和使用,不用进一步洗净,在从 Milli-Q 水准备的 4.5mM NaCl 被溶化了。 被溶化的 ß Lg 然后被上升对酸碱度 9 为了分离蛋白质到其单节显性的种类。 准备包含适当的数量 0.1M HCl 的 4.5mM NaCl 的一个等于数量给这个各自 4.2 和 1mg/mL 的目标酸碱度和浓度带来联合的解决方法。 两个解决方法被过滤了 (0.2 µm 补白, AG,德国) 裁缝机,立即在分析之前然后混合。

颗粒大小的确定

ß Lg 综合的大小分布使用 Malvern Zetasizer 纳诺 ZS 是确定的。 相关性时间是每运行和三运行的七秒每个评定。 QELS 用于确定大小分布五十分钟。

结果

图 1 显示在这个运动实验期间收集的强度大小分布在时间 (t) = 0。 如明显这里, QELS 结果几乎立即指示那, ß Lg 在二明显的范围人口的综合。

图 1. 强度 1mg/mL ß Lg 的大小分布在酸碱度 4.2 的 4.5mM NaCl 在时间 = 0。

更加小型的人口有大约 5.4nm 一条水力直径。 使用一个已知的质量与球状蛋白质的范围关系,显示在式 1, 5.4nm 蛋白质的分子量是大约 35 kDa,一致与 ß Lg 蛋白质的由两部分组成的表单。

这个实验的运动跟踪在表 2 显示,作为实验时间功能,显示强度和 Z 平均直径。

图 2. 运动跟踪在 4.5mM NaCl 的 1.0mg/mL ß Lg 在酸碱度 4.2。

因此分散强度是大致成比例的对浓度和分子量的正方形,并且对高次综合的形成是相当敏感的。 Z 平均直径是微粒合奏的平均直径和从相关函数 (累积量方法) 的线性化的表单的倾斜派生。 如在图 2 中看到,高次综合的形成在这个实验的前 20-25 分钟内发生。 在很长时间,分散强度是相对地恒定的,建议二聚体综合平衡达到。 高次综合的安定在很长时间的也是明显的在表 3,显示从这个运动实验的所选的强度大小分布。

图 3. 选择了强度大小分布从这个 ß Lg 运动实验。

在相对数量的减少二聚体也被观察了在这个实验的时间路线。 在最初的条件,显示在图 1 上,二聚体含量占 80% 分散强度。 在实验运行结束时,对分散强度的摊缴由二聚体稳定了在大致 10% 这个总额 (参见图 4)。 如在图 4 中看到,在分散超级综合的强度和范围安定的一个增量能随着时间的推移也被看到。 从 20% 增加的综合的分散强度到 90% 在运行期间,与综合的范围根本地被稳定在近似 425nm。

图 4. ß Lg 的非定常强度大小分布在酸碱度 4.2 的 4.5mM NaCl。

注意: 参考一个完整的目录通过是指原始单据是可用的。

来源: “β乳球蛋白质的汇总”,由 Malvern 仪器的应用注解。

关于此来源的更多信息请参观 Malvern 有限公司 (英国) 仪器Malvern 仪器 (美国)

Date Added: May 9, 2005 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 13. June 2013 01:13

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