â 乳球蛋白質的靜電彙總使用類似電光散射的 Malvern

包括的事宜

背景
實驗
     範例準備
     顆粒大小的確定
結果

背景

在 1934年,帕爾默首先描述了 ß 乳球蛋白質 (ß Lg) 的分隔從牛牛奶的乳清分數。 五十年,在這個實際結構可能通過 X-射線結晶學,被闡明此發現做。前。 因為這是極大的利益和重要性對處理奶製品,這些的大部分在熱導致的彙總附近學習中心。 儘管歲月研究, ß 乳球蛋白質的特定功能将完全地瞭解。 此工作的目的將提供 ß Lg 靜電彙總的研究在低離子強度 (i) 和在 PH 值在彙總發生 (pI)以足够慢的費率通過準彈性光散射評估的等電位點下 (QELS)。

實驗

範例準備

ß Lg A&B,採購從斯格碼 Aldrich 和使用,不用進一步洗淨,在從 Milli-Q 水準備的 4.5mM NaCl 被溶化了。 被溶化的 ß Lg 然後被上升對酸碱度 9 為了分離蛋白質到其單節顯性的種類。 準備包含適當的數量 0.1M HCl 的 4.5mM NaCl 的一個等於數量給這個各自 4.2 和 1mg/mL 的目標酸碱度和濃度帶來聯合的解決方法。 兩個解決方法被過濾了 (0.2 µm 補白, AG,德國) 裁縫機,立即在分析之前然後混合。

顆粒大小的確定

ß Lg 綜合的大小分佈使用 Malvern Zetasizer 納諾 ZS 是確定的。 相關性時間是每運行和三運行的七秒每個評定。 QELS 用於確定大小分佈五十分鐘。

結果

圖 1 顯示在這個運動實驗期間收集的強度大小分佈在時間 (t) = 0。 如明顯這裡, QELS 結果幾乎立即指示那, ß Lg 在二明顯的範圍人口的綜合。

圖 1. 強度 1mg/mL ß Lg 的大小分佈在酸碱度 4.2 的 4.5mM NaCl 在時間 = 0。

更加小型的人口有大約 5.4nm 一條水力直徑。 使用一個已知的質量與球狀蛋白質的範圍關係,顯示在式 1, 5.4nm 蛋白質的分子量是大約 35 kDa,一致與 ß Lg 蛋白質的由兩部分組成的表單。

這個實驗的運動跟蹤在表 2 顯示,作為實驗時間功能,顯示強度和 Z 平均直徑。

圖 2. 運動跟蹤在 4.5mM NaCl 的 1.0mg/mL ß Lg 在酸碱度 4.2。

因此分散強度是大致成比例的對濃度和分子量的正方形,并且對高次綜合的形成是相當敏感的。 Z 平均直徑是微粒合奏的平均直徑和從相關函數 (累積量方法) 的線性化的表單的傾斜派生。 如在圖 2 中看到,高次綜合的形成在這個實驗的前 20-25 分鐘內發生。 在很長時間,分散強度是相對地恆定的,建議二聚體綜合平衡達到。 高次綜合的安定在很長時間的也是明顯的在表 3,顯示從這個運動實驗的所選的強度大小分佈。

圖 3. 選擇了強度大小分佈從這個 ß Lg 運動實驗。

在相對數量的減少二聚體也被觀察了在這個實驗的時間路線。 在最初的條件,顯示在圖 1 上,二聚體含量佔 80% 分散強度。 在實驗運行結束時,對分散強度的攤繳由二聚體穩定了在大致 10% 這個總額 (參見圖 4)。 如在圖 4 中看到,在分散超級綜合的強度和範圍安定的一個增量能隨著時間的推移也被看到。 從 20% 增加的綜合的分散強度到 90% 在運行期間,與綜合的範圍根本地被穩定在近似 425nm。

圖 4. ß Lg 的非定常強度大小分佈在酸碱度 4.2 的 4.5mM NaCl。

注意: 參考一個完整的目錄通過是指原始單據是可用的。

來源: 「β乳球蛋白質的彙總」,由 Malvern 儀器的應用註解。

關於此來源的更多信息请請參觀 Malvern 有限公司 (英國) 儀器Malvern 儀器 (美國)

Date Added: May 9, 2005 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 13. June 2013 01:16

Ask A Question

Do you have a question you'd like to ask regarding this article?

Leave your feedback
Submit