:: AZoNanotechnology Artikel
.jpg)
Besproken onderwerpen
Introductie
Integratie van de Atomic Force Microscope en Omgekeerde lichtmicroscoop
CoverslipHolder en BioCell is ontworpen om de beeldkwaliteit te optimaliseren
Piëzo in JPK Instruments
Het testen van de Kalibratie van optische beelden
Conclusie
Introductie
Atomaire kracht microscopie (AFM) en optische microscopie, in het bijzonder fluorescentie microscopie, maak een krachtige combinatie in de studie van biologische monsters. AFM is niet onderworpen aan resolutie van Abbe's te beperken, en kan beelden te genereren met een veel hogere resolutie dan het licht microscopie. Echter, zoals het contrast wordt gegenereerd in antwoord op de structurele eigenschappen van het monster, kan het een uitdaging om specifieke structuren op te sporen in een heterogene steekproef, zoals een cel. Door het combineren van de twee technieken, kan een hogere resolutie van structurele informatie worden gegenereerd met behulp van AFM. Latere correlatie met fluorescent gelabelde markers kan informatie verschaffen over de samenstelling, en daarmee de functie van de geïdentificeerde structuren.
Integratie van de Atomic Force Microscope en Omgekeerde lichtmicroscoop
Het ontwerp van de NanoWizard ® en NanoWizard ® II AFM van JPK is zodanig dat de atomic force microscoop is geïntegreerd in een omgekeerde lichtmicroscoop, zonder dat de functionaliteit ervan. Dit laat AFM beeldvorming worden gecombineerd met contrast technieken, waaronder fase contrast, DIC, laser scanning confocale microscopie en TIRF. Een belangrijke factor in de effectiviteit van deze integratie is dat de JPK instrumenten zijn tip-scanners. Dat wil zeggen, tijdens AFM beeldvorming van het monster wordt nog steeds gehouden, terwijl de tip beweegt in de mode raster over het oppervlak te bouwen de afbeelding. In het geval van sample-scanning instrumenten, wordt het monster af te beelden voortdurend in beweging in de optische microscopie beeld, terwijl AFM het scannen wordt uitgevoerd, wat betekent dat de ware simultane beeldvorming niet goed mogelijk is (figuur 1).
.jpg)
Figuur 1. Tip scanner vs monster scanner. De overname van epifluorescerende beelden tijdens de AFM beeldacquisitie met een tip scanner (A) en een monster scanner (B). Het monster beweegt zich in (B) de fluorescerende structuren kunnen niet meer worden afgebeeld zonder vegen. Dezelfde cel wordt weergegeven in beide beelden.
CoverslipHolder en BioCell is ontworpen om de beeldkwaliteit te optimaliseren
Hoewel deze hardware design kenmerken het begin van het verstrekken van echte integratie zijn er ook andere factoren die moeten worden aangepakt. De eerste is de gebruikte sample houder. Als AFM en optische microscopie zijn fundamenteel verschillende technieken (een is gebaseerd op fysieke interactie en de andere op de diffractie van het licht) zijn er verschillende vereisten voor een effectieve steekproef ondersteunt. Voor het verkrijgen van hoge kwaliteit optische beelden, in het bijzonder met sterke vergroting lenzen (63x en 100x) is het best om zeer dunne cover-glas te gebruiken met een dikte van ongeveer 170 micrometer.