抗体とペプチッド Microspots 間の調査の相互作用

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カバーされるトピック

概要
 導入
 実験プロシージャ
 蛍光性の分析
 Sarfus の分析
 結果および議論
 結論
 Sarfus の利点

概要

抗体とペプチッド microspots 間の相互作用は Sarfus の技術と調査されます。孵化の前に、測定は microspot の厚さが印刷されたペプチッド解決の集中対増加することを示します。抗体との孵化は Sarfus の技術を使用して容易に特徴付けられたペプチッド microspot の蛋白質の層の形成で起因します。

この作業はで出版されました: V. Souplet、 R. Desmet、 O.Melnyk、 J.Pept。 Sci。、 2007 年; 13:451-457。

導入

ペプチッドマイクロアレイは生物的 analytes の存在や機能のための複雑なサンプルを厳密に調べるために魅力的な技術を提供します。光学の、電気または機械方法は捕獲された分子の検出に使用することができます。私達は Sarfus が配列されたペプチッドプローブの捕獲される細目によって形作られる蛋白質のフィルムの急速なイメージ投射を可能にすることをここに示します。

実験プロシージャ

蛍光性の分析

蛍光性の検出は標準共焦点のマイクロアレイのスキャンナーを使用して 532nm で行われました。

Sarfus の分析

この調査では、波の基板の最上の層は SiO (₂ 「標準波」) です。光学画像は LEICA DM4000 の光学顕微鏡で得られ、ソニー 3CCD のカメラによって集められます。第 2 画像は Sarfusoft (Nanolane のソフトウェア) と扱われ、口径測定の後で、 3D 画像は生成されます。

結果および議論

インフルエンザの hemagglutinin および myc 蛋白質 ( (HA)myc) から得られた札のペプチッドはこの調査で使用されました。それらは無接触圧電気の arrayer (0.5₂ から 100µM (6 つの集中、 3 つの低下、 1nL オーバーオール) までを使用して SiO の 2 つの nm アミン修正された基板で異なった集中の図 1) 印刷されました。最後に、標準波は BSA と洗浄され、飽和しました。

HA および myc のペプチッド microspot の図 1. 抗体の捕獲。

microspot の厚さの量を示すのに使用される方法が Ha 抗体 (10µg/mL) と孵化するペプチッド HA (100µM) で説明されます。図 2A ショー Sarfus の典型的な画像。口径測定の後で、点の偽カラースケールそして 3D 眺め (図 2B 及び 2C) は得られます。層の厚さはプロフィールの抽出 (図第 2) の後で容易に定められました。

ペプチッド HA (100µM) の図 2. 標準波で印刷された 3-aminopropyltrimethoxysilane と Microspot は silanized、孵化しました (ネズミ科反 HA 抗体との 1h の 37°C) (10µg/ml)。 A) Sarfus の画像。 B) 偽カラー画像。 C) 3D の眺め。 D) プロフィールの抽出 (2B の点線から)。

私達は次に抗体の層の形成の特定性を検査しました。これのために、反 HA との孵化 (37°C、 250µg/mL の 1h) または Tween® の前の反myc ネズミ科の抗体は 20 および 2% の PBS、水 (BSA)およびエタノールが付いている牛のような血清の Albumine のそして連続的な洗浄行われました。

重要な変更が反myc 抗体 (図 3B) の前で反 HA 抗体の前で HA の microspot と myc の microspots のためにできなかった一方ペプチッド HA (図 3A) の反 HA 抗体およびペプチッド myc (図 3D) の反myc 抗体は点を表示しました (図 3C) 観察。

図は反 HA (5A) または反myc (5B) 抗体とそして反 HA (5C) と孵化したまたは反myc myc のペプチッドマイクロアレイの HA のペプチッドマイクロアレイの Sarfus の 3. の画像孵化しました (5D)。

HA または myc の microspots の厚さに対するペプチッドまたは集中反 HA のの効果は抗体の検査されました (図 4A)。ペプチッドは 6 つの集中で (0.5 から 100µM から) 印刷され、各抗体の集中は全く同じ 3つのもので (0.01 から 10µg/ml への) テストされました。点の高さは非常に再生可能であると (microspot の高さの中央および interquartile 範囲に相当して) 見つけられました。

低いペプチッド集中 (1µM) で、ペプチッド/抗体の複合体の表面の集中はおそらく周囲 BSA の層 (図 5) より厚い層与える十分の高さではないです。 10µM の上のペプチッド集中のためのプラトーは抗体の集中がであるものは何でも達されます。これはこの集中の上のペプチッドによって表面の彩度に帰因します。 HA の microspot と対照をなして、 10µg/mL の反 HA 抗体の前のペプチッド myc の microspot の高度は抗体の層の形成の特定性を説明する BSA/Tween 20® との洗浄の後で得られたそれらと著しく異なりませんでした。