항체와 펩티드 Microspots 사이 조사 상호 작용

커버되는 토픽

요약
소개
실험적인 절차
형광 분석
Sarfus 분석
결과와 면담
결론
Sarfus의 이점

요약

항체와 펩티드 microspots 사이 상호 작용은 Sarfus 기술로 공부됩니다. 외피의 앞에, 측정은 microspot 간격이 인쇄한 펩티드 해결책의 사격량 대 증가한다는 것을 보여줍니다. 항체를 가진 외피는 Sarfus 기술을 사용하여 쉽게 성격을 나타낸 펩티드 microspot에 단백질 층의 대형 귀착됩니다.

이 일은에서 간행되었습니다: V. Souplet, R. Desmet, O.Melnyk, J.Pept. Sci. , 2007년; 13:451-457.

소개

펩티드 microarrays는 매력적인 생물학 분석물의 존재 및 또는 기능을 위한 복잡한 견본을 시험하기 위하여 기술을 제공합니다. 광학, 전기 또는 기계적인 방법은 붙잡은 분자의 탐지를 위해 사용될 수 있습니다. 우리는 Sarfus가 소집한 펩티드 탐사기의 붙잡은 특성에 의해 형성된 단백질 필름의 급속한 화상 진찰을 허용한다는 것을 여기에서 보여줍니다.

실험적인 절차

형광 분석

형광 탐지는 표준 confocal microarray 스캐너를 사용하여 532nm에 실행되었습니다.

Sarfus 분석

이 연구 결과에서는, 파도 기질의 최상 층은 SiO (2 "표준 파도 ")입니다. 광학적인 심상은 LEICA DM4000 광학적인 현미경에 장악되고 소니 3CCD 사진기를 통해 집합됩니다. 제 2 심상은 Sarfusoft (Nanolane 소프트웨어)로 취급됩니다 구경측정 후에, 3D 심상은 생성되고.

결과와 면담

유행성감기 hemagglutinin와 myc 단백질 ( (HA)myc)에서 파생된 꼬리표 펩티드는 이 연구 결과에서 이용되었습니다. 그(것)들은 몸의 접촉이 없는 압전 arrayer (0.52 에서 100µM (6개의 사격량, 3개의 투하, 1nL 작업 바지)까지를 사용하여 SiO 2개의 nm 아민 변경된 기질에 다른 사격량에 숫자 1) 인쇄되었습니다. 마지막으로, 표준 파도는 BSA로 세척되고 포화되었습니다.

헬기공격과 myc 펩티드 microspot에 숫자 1. 항체 붙잡음.

microspot 간격의 양을 정하기 위하여 이용된 방법은 헬기공격 항체 (10µg/mL)로 잠복한 펩티드 헬기공격 (100µM)에 설명됩니다. 숫자 2A 쇼 Sarfus 전형적인 심상. 구경측정 후에, 반점의 틀리 군기 가늠자 그리고 3D 전망 (숫자 2B & 2C)는 장악됩니다. 층 간격은 단면도 적출 (숫자 제 2) 후에 쉽게 결정되었습니다.

표준 파도에 인쇄된 펩티드 3-aminopropyltrimethoxysilane로 헬기공격 (100µM)의 숫자 2. Microspot는 silanized 잠복했습니다 (쥐과 반대로 헬기공격 항체를 가진 1h에 37°C) (10µg/ml). 아) Sarfus 심상. B) 틀리 군기 심상. C) 3D 전망. D) 단면도 적출 (2B에 점선에서).

우리는 다음 항체 층 대형의 특이성을 검토했습니다. 이것을 위해, 반대로 헬기공격을 가진 외피 (37°C, 250µg/mL에 1h) 또는 Tween®의 면전에서 반대로 myc 쥐과 항체는 20와 2% PBS, 근해 (BSA) 및 에타놀을 가진 둔감한 혈청 Albumine 그 후에 계속되는 세척 능력을 발휘했습니다.

중요한 변경이 반대로 myc 항체 (숫자 3B)의 면전에서 반대로 헬기공격 항체의 면전에서 헬기공격 microspot와 myc microspots를 위해 수 있지 않았더라도 반면 펩티드 헬기공격 (숫자 3A)에 반대로 헬기공격 항체와 펩티드 myc (숫자 3D)에 반대로 myc 항체는 반점을 디스플레이했습니다 (숫자 3C) 관찰될.

숫자는 반대로 헬기공격 (5A) 또는 반대로 myc (5B) 항체로 그리고 반대로 헬기공격 (5C)로 잠복한 또는 반대로 myc myc 펩티드 microarrays의 헬기공격 펩티드 microarrays의 Sarfus 3. 심상 잠복했습니다 (5D).

헬기공격 또는 myc microspots의 간격에 대한 펩티드 농도 반대로 헬기공격의 효력은 항체 검토되었습니다 (숫자 4A). 펩티드는 6개의 다른 사격량에 (0.5에서 100µM까지) 인쇄되었습니다 각 항체 농도는 3개 한벌에서 (0.01에서 10µg/ml에) 시험되고. 반점 고도는 높게 재생 가능하기 위하여 (microspot 고도의 메디아와 사분위 범위에 일치하는) 찾아냈습니다.

낮은 펩티드 농도 (1µM)에, 펩티드/항체 복합물의 지상 사격량은 아마 주위 BSA 층 (숫자 5) 보다는 더 두꺼운 층 주는 충분히 고도가 아닙니다. 10µM 이상 펩티드 농도를 위한 고원은 항체 농도가이다 무엇이건 도달됩니다. 이것은 이 사격량의 위 펩티드에 의해 표면의 포화에 기인합니다. 헬기공격 microspot와 달리, 10µg/mL에 반대로 헬기공격 항체의 면전에서 펩티드 myc microspot의 고도는 항체 층 대형의 특이성을 설명하는 BSA/Tween 20®로 세척 후에 장악된 그들과 현저하게 다르지 않았습니다.

반점 간격의 숫자 4. A. Evolution 대 펩티드 헬기공격 microspot 고도와 농도 반대로 헬기공격 사이 펩티드 농도 B. Relationship 항체.

1개는 microspot 고도 (숫자 4B)2 반대로 헬기공격 항체 농도와 헬기공격 (50µM) 사이에서 관찰된 선형 관계 (r=0.98)를 주의해야 합니다.

BSA 흡착 후에 표면의 숫자 5. 밑그림.

결론

Sarfus는 소집 펩티드 탐사기에 항체의 특정 바인딩에 의해 형성된 단백질 층의 급속한 화상 진찰을 허용합니다. 층 간격과 항체 농도 사이 선형 관계는 찾아냈습니다.

Sarfus의 이점

Sarfus의 이점은 다음을 포함합니다:

  • 통계적인 결과를 위한 단단 특성 기술
  • 비 기술을 레테르를 붙이는 비 접촉
  • 시계 (60µm에서2 몇몇 mm에2)
  • 실내 온도와 대기압으로 분석

근원: Nanolane

이 근원에 추가 정보를 위해 Nanolane를 방문하십시오

Date Added: Sep 6, 2009 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 13. June 2013 23:22

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