抗体和肽 Microspots 之间的调查的交往

包括的事宜

摘要
简介
实验程序
荧光分析
Sarfus 分析
结果和论述
结论
Sarfus 的好处

摘要

抗体和肽 microspots 之间的交往学习与 Sarfus 技术。 在孵出前,评定向显示 microspot 厚度增加与被打印的肽解决方法的浓度。 与抗体的孵出导致蛋白质层的形成在使用 Sarfus 技术,容易地被分析的肽 microspot 的。

此工作被发布了在: V. Souplet, R. Desmet, O.Melnyk, J.Pept。 Sci。 2007年; 13:451-457.

简介

肽微阵列提供有吸引力的技术探查生物分析物的出现和功能的复杂范例。 光学,电子或者机械方法可以为被获取的分子的检测使用。 我们向显示这里 Sarfus 允许蛋白质影片迅速想象特定形成的被获取排列的肽探测。

实验程序

荧光分析

使用一个标准共焦的微阵列扫描程序,荧光检测进行了在 532nm。

Sarfus 分析

在此研究中,海浪基体的最上面的层是 SiO2 (‘标准海浪’)。 光学图象在 LEICA DM4000 光学显微镜得到并且通过索尼 3CCD 照相机收集。 第 2 个图象对待与 Sarfusoft (Nanolane 软件),并且在定标以后, 3D 图象被生成。

结果和论述

从流行性感冒 hemagglutinin 和 myc 蛋白质 (HA)派生的标签肽 (myc) 用于此研究。 他们在 2 个 nm 胺物被修改的 SiO 基体2 被打印了使用一没有接触的压电 arrayer (图 1) 以从 0.5 的不同的浓度到 100µM (6 浓度、 3 下落, 1nL 所有)。 终于,标准海浪洗涤了并且饱和了与 BSA。

在 HA 和 myc 肽 microspot 的图 1. 抗体获取。

使用的方法定量 microspot 厚度在肽 HA (100µM) 说明孵化与 HA 抗体 (10µg/mL)。 图 2A 显示一个典型的 Sarfus 图象。 在定标以后,错误颜色缩放比例和 3D 图 (图 2B & 2C) 这个地点得到。 层厚度在配置文件提取 (图第 2) 以后容易地被确定了。

图 2. 在标准海浪 HA (100µM) 打印的 Microspot 肽 silanized 与 3-aminopropyltrimethoxysilane 并且孵化了 (1h 在 37°C) 与鼠科反 HA 抗体 (10µg/ml)。 A) Sarfus 图象。 B) 错误颜色图象。 C) 3D 视图。 D) 配置文件提取 (从在 2B 的虚线)。

我们其次检查抗体层形成特异性。 对于此,孵出 (在 37°C, 250µg/mL 的 1h) 与反 HA 或在 Tween® 面前的反myc 鼠科抗体与 PBS、水和对氨基苯甲酸二的 (BSA) 20 和 2% 迟钝的血清 Albumine 然后连续的洗涤执行。

反 HA 在肽 HA (图 3A) 的抗体和在肽 myc (图 3D) 的反myc 抗体显示了地点,而重大的更改不可能被观察对 HA microspot 在反myc 抗体 (图 3B) 面前和对 myc microspots 在反 HA 抗体 (图 3C) 面前。

HA 肽微阵列的 3. Sarfus 图象孵化了与一反 HA (5A) 或反myc (5B) 抗体和 myc 反myc 肽的微阵列孵化与一反 HA (5C) 或 (5D)。

肽或反 HA 的作用抗体含量对 HA 或 myc microspots 的厚度被检查 (图 4A)。 肽被打印了以六不同浓度 (从 0.5 到 100µM),并且每抗体含量 (从 0.01 到 10µg/ml) 在一式三份被测试了。 (与 microspot 高度相应的中间和四分位差) 发现地点高度高度再现的。

以低肽含量 (1µM),肽/抗体复杂的表面浓度比周围的 BSA 层 (图 5) 很可能不是产生层厚实的足够高度。 肽含量的一个高原在 10µM 上被到达什么抗体含量是。 这归因于表面的饱和由在此浓度上的肽。 与 HA microspot 对比,肽 myc microspot 的高度在反 HA 抗体面前的在 10µg/mL 从在洗涤获得的那些不是较大不同与 BSA/Tween 20® 以后,说明抗体层形成的特异性。

图 4. A. 地点厚度 Evolution 与肽含量在肽 HA microspot 高度和反 HA 之间的 B. Relationship 抗体含量。

一应该注意这个线性关系 (r=0.982) 被观察在反 HA 抗体含量和 HA (50µM) 之间 microspot 高度 (图 4B)。

表面的图 5. 草图在 BSA 吸附以后的。

结论

Sarfus 允许蛋白质层迅速想象抗体特定捆绑形成的对列阵肽探测。 找到层厚度和抗体含量之间的一个线性关系。

Sarfus 的好处

Sarfus 的好处包括:

  • 统计结果的快速描述特性技术
  • 非非标记技术的联络
  • 视野 (从 60µm2 到几 mm2)
  • 分析以室温和大气压

来源: Nanolane

关于此来源的更多信息请参观 Nanolane

Date Added: Sep 6, 2009 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 13. June 2013 22:58

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