抗體和肽 Microspots 之間的調查的交往

包括的事宜

摘要
簡介
實驗程序
熒光分析
Sarfus 分析
結果和論述
結論
Sarfus 的好處

摘要

抗體和肽 microspots 之間的交往學習與 Sarfus 技術。 在孵出前,評定向顯示 microspot 厚度增加與被打印的肽解決方法的濃度。 與抗體的孵出導致蛋白質層的形成在使用 Sarfus 技術,容易地被分析的肽 microspot 的。

此工作被發布了在: V. Souplet, R. Desmet, O.Melnyk, J.Pept。 Sci。 2007年; 13:451-457.

簡介

肽微陣列提供有吸引力的技術探查生物分析物的出現和功能的複雜範例。 光學,電子或者機械方法可以為被獲取的分子的檢測使用。 我們向顯示這裡 Sarfus 允許蛋白質影片迅速想像特定形成的被獲取排列的肽探測。

實驗程序

熒光分析

使用一個標準共焦的微陣列掃描程序,熒光檢測進行了在 532nm。

Sarfus 分析

在此研究中,海浪基體的最上面的層是 SiO2 (『標準海浪』)。 光學圖像在 LEICA DM4000 光學顯微鏡得到并且通過索尼 3CCD 照相機收集。 第 2 個圖像對待與 Sarfusoft (Nanolane 軟件),并且在定標以後, 3D 圖像被生成。

結果和論述

從流行性感冒 hemagglutinin 和 myc 蛋白質 (HA)派生的標籤肽 (myc) 用於此研究。 他們在 2 個 nm 胺物被修改的 SiO 基體2 被打印了使用一沒有接觸的壓電 arrayer (圖 1) 以從 0.5 的不同的濃度到 100µM (6 濃度、 3 下落, 1nL 所有)。 終於,標準海浪洗滌了并且飽和了與 BSA。

在 HA 和 myc 肽 microspot 的圖 1. 抗體獲取。

使用的方法定量 microspot 厚度在肽 HA (100µM) 說明孵化與 HA 抗體 (10µg/mL)。 圖 2A 顯示一個典型的 Sarfus 圖像。 在定標以後,錯誤顏色縮放比例和 3D 圖 (圖 2B & 2C) 這個地點得到。 層厚度在配置文件提取 (圖第 2) 以後容易地被確定了。

圖 2. 在標準海浪 HA (100µM) 打印的 Microspot 肽 silanized 與 3-aminopropyltrimethoxysilane 并且孵化了 (1h 在 37°C) 與鼠科反 HA 抗體 (10µg/ml)。 A) Sarfus 圖像。 B) 錯誤顏色圖像。 C) 3D 視圖。 D) 配置文件提取 (從在 2B 的虛線)。

我們其次檢查抗體層形成特異性。 對於此,孵出 (在 37°C, 250µg/mL 的 1h) 與反 HA 或在 Tween® 面前的反myc 鼠科抗體與 PBS、水和對氨基苯甲酸二的 (BSA) 20 和 2% 遲鈍的血清 Albumine 然後連續的洗滌執行。

反 HA 在肽 HA (圖 3A) 的抗體和在肽 myc (圖 3D) 的反myc 抗體顯示了地點,而重大的更改不可能被觀察對 HA microspot 在反myc 抗體 (圖 3B) 面前和對 myc microspots 在反 HA 抗體 (圖 3C) 面前。

HA 肽微陣列的 3. Sarfus 圖像孵化了與一反 HA (5A) 或反myc (5B) 抗體和 myc 反myc 肽的微陣列孵化與一反 HA (5C) 或 (5D)。

肽或反 HA 的作用抗體含量對 HA 或 myc microspots 的厚度被檢查 (圖 4A)。 肽被打印了以六不同濃度 (從 0.5 到 100µM),并且每抗體含量 (從 0.01 到 10µg/ml) 在一式三份被測試了。 (與 microspot 高度相應的中間和四分位差) 發現地點高度高度再現的。

以低肽含量 (1µM),肽/抗體複雜的表面濃度比周圍的 BSA 層 (圖 5) 很可能不是產生層厚實的足够高度。 肽含量的一個高原在 10µM 上被到達什麼抗體含量是。 這歸因於表面的飽和由在此濃度上的肽。 與 HA microspot 對比,肽 myc microspot 的高度在反 HA 抗體面前的在 10µg/mL 從在洗滌獲得的那些不是較大不同與 BSA/Tween 20® 以後,說明抗體層形成的特異性。

圖 4. A. 地點厚度 Evolution 與肽含量在肽 HA microspot 高度和反 HA 之間的 B. Relationship 抗體含量。

一應該注意這個線性關係 (r=0.982) 被觀察在反 HA 抗體含量和 HA (50µM) 之間 microspot 高度 (圖 4B)。

表面的圖 5. 草圖在 BSA 吸附以後的。

結論

Sarfus 允許蛋白質層迅速想像抗體特定捆綁形成的對列陣肽探測。 找到層厚度和抗體含量之間的一個線性關係。

Sarfus 的好處

Sarfus 的好處包括:

  • 統計結果的快速描述特性技術
  • 非非標記技術的聯絡
  • 視野 (從 60µm2 到幾 mm2)
  • 分析以室溫和大氣壓

來源: Nanolane

關於此來源的更多信息请請參觀 Nanolane

Date Added: Sep 6, 2009 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 13. June 2013 23:02

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