Caracterización de la Talla y del Estado del Nanoparticle Antes de los Estudios de Nanotoxicological Usando Análisis Que Sigue Su Trayectoria del Nanoparticle

Por AZoNano

Temas Revestidos

Introducción
Métodos y Materiales
     Plasma Humana
     Partículas
Resultados
Discusión
Conclusiones

Introducción

Antes de comenzar cualquier estudio nanotoxicological, es imprescindible conocer el estado de los nanoparticles usados, y particularmente su talla y distribución dimensional en media de una prueba apropiados.

NanoSight ha desarrollado un instrumento único para caracterizar nanoparticles en la suspensión líquida. Esta nota discute la aplicación de este instrumento en la caracterización de los nanoparticles del oro y de sus agregados en un líquido biológico relevante. A Diferencia de técnicas clásicas de la dispersión luminosa, la técnica el Seguir Su Trayectoria del Nanoparticle y (NTA) del Análisis permite que los nanoparticles sean clasificados en suspensión sobre una base de la partícula-por-partícula, una comprensión más de alta resolución y por lo tanto mejor el permitir de la agregación que métodos del conjunto (tales como Dispersión Luminosa Dinámica, DLS). El estudio observa el cambio de tamaño de los nanoparticles del oro que comparan el caso del disolvente estándar del dispersor (almacenador intermediaro del citrato) a un plasma diluída (que contiene las proteínas).

Métodos y Materiales

Plasma Humana:

La Sangre fue tomada de donantes aparentemente sanos. Los tubos fueron centrifugados, para el minuto 5 en 800 RCF para granular a los glóbulos rojos y blancos. El sobrenadante (el plasma) fue transferido a los tubos etiqueta y salvado en -80°C. Sobre descongelar el plasma fue centrifugado otra vez para el minuto 3 en el kRCF 16,1 para reducir más lejos la presencia de glóbulos rojos y blancos. El sobrenadante fue transferido a un nuevo vaso, tomando cuidado para no perturbar la bolita.

Partículas:

Los nanoparticles del patrón Oro del NIST de 60 nanómetro fueron utilizados (el material de referencia del NIST 8013). Éstos fueron salvados, preparados y utilizados según los partes de la investigación relevantes. El oro fue diluido a una concentración de aproximadamente 108 particles/ml usando el almacenador intermediaro estándar del citrato de pH=7.19. Para las dispersiones en plasma, el plasma humana era 1:1000000 diluido en almacenador intermediaro del citrato, y el µl 10 de los nanoparticles del oro fue diluido con el µl 790 del plasma diluida.

El Seguir Su Trayectoria y el Análisis del Nanoparticle fueron realizados en un NanoSight LM10. Toda La preparación y mediciones de la muestra fueron realizadas en la Universidad Dublín, Irlanda y el análisis fue realizado por NanoSight usando una versión beta del software de NTA 2,0. Los vídeos Múltiples, cada 166s de largo, fueron registrados y analizados en proceso discontinuo para asegurar la invariación estadística. Dado que el plasma es un media iónico natural, se observa que la aplicación la agregación de la proteína será siempre problemática.

Cuadro 1. El Instrumento de NanoSight LM10.

Cuadro 2. Imagen de vídeo de 60 partículas del Oro del nanómetro según lo capturado por el instrumento de NanoSight LM10.

Resultados

Los Vídeos de los nanoparticles fueron registrados (el Cuadro 2), seguido su trayectoria y analizado para la talla cuando está diluido en almacenador intermediaro del citrato y en plasma humana, y corregido para la longitud del carril (Cuadro 3). La medición de la muestra también fue hecha por DLS (el Cuadro 4) y todos los resultados se resumen en el Cuadro 1.

Cuadro 3. resultados de NanoSight usando NTA.

Cuadro 4. Medición de la misma muestra por DLS.

Discusión

Los métodos para la medición del oro diluida en citrato eran como ésos detallados en los materiales de referencia señalan. Un resumen de los resultados según lo medido por el NIST se puede considerar en el Cuadro 2.

NTA se puede utilizar para determinar visualmente y por una medición de la concentración que las partículas todavía monodispersed que agregan pruebas a la hipótesis que las proteínas en suspensión actúan para recubrir los nanoparticles (Cuadro 5) (y que el aumento de tamaño no es debido a la agregación). No es posible sacar esta información puramente de la medición de DLS, que es conjunto basado.

El Cuadro 5. pruebas de NTA utiliza la hipótesis que las proteínas en suspensión actúan para recubrir los nanoparticles.

Resumen del Cuadro 1. de resultados por métodos de NTA y de DLS.

Técnica

Material

Parámetro

Valor (nanómetro)

Desvío (nanómetro)

NTA

Oro de 60 nanómetro

Medio

61,22

0,93

Modo

60,08

1,01

Estándar
desviación

6,57

0,92

NTA

Oro de 60 nanómetro (plasma)

Medio

70,4

1,8

Modo

68,5

1,67

Estándar
desviación

9,3

0,83

DLS

Oro de 60 nanómetro

Modo

58,5

-

DLS

Oro de 60 nanómetro (plasma)

Modo

70,7

-

Resumen del Cuadro 2. de resultados según lo medido por el NIST.

Técnica

Formulario del Analito

Nominal 60 nanómetro

AFM

Seco, depositado en el substrato

55.4±0.3

SEM

Seco, depositado en el substrato

54.9±0.4

TEM

Seco, depositado en el substrato

56.0±0.5

ES-DMA

Seqúese, aerosol

56.3±1.5

DLS (173°)

Suspensión líquida Diluida

56.6±1.4

DLS (el 90°)

Suspensión líquida Diluida

55.3±8.3

SAXS

Suspensión líquida Nativa

53.2±5.3

El cambio de tamaño registrado en los Cuadros 2 y 3 muestra un aumento de tamaño del nanoparticle de aproximadamente 10 nanómetro, correspondiente a 5 capas densamente adsorbidas de la proteína del nanómetro que revisten el nanoparticle.

Conclusiones

Hay un cambio importante y mensurable en la distribución dimensional de partícula de los nanoparticles del oro del monodisperse en presencia de un media biológico tal como plasma humana. Una metodología conveniente para la medición del espesor de la capa del plasma usando dos métodos independientes, NTA y DLS, se ha utilizado para validar uno otro.

La anchura y el medio de las distribuciones medidas por DLS y NTA es similares a ésa determinado por el NIST. En presencia de plasma, la talla de partícula y la distribución dimensional de partícula aumentan ligeramente. NTA ofrece la capacidad de medir la concentración absoluta que se puede utilizar también para dar una concentración de número de los nanoparticles del oro del NIST. NTA es también ideal para determinar y contar los agregados del nanoparticle tales como dimeros debido a su capacidad de visualizar los nanoparticles individualmente. Representa así (para los nanoparticles y los regímenes de la concentración usados aquí) una herramienta útil en el arsenal de técnicas disponibles para el bionanoscience y los bionanointeractions en los nanomaterials dirigidos en biología.

Esta información ha sido originaria, revisada y adaptada de los materiales proporcionados por NanoSight.

Para más información visite por favor NanoSight.

Date Added: Dec 22, 2009 | Updated: Mar 7, 2013

Last Update: 7. March 2013 10:44

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