Visualisatie, het Rangschikken en het Tellen van Virussen en Bacteriofagen in Vloeibare Opschorting die het Volgen Nanoparticle Analyse Gebruikt

Door AZoNano

Besproken Onderwerpen

Inleiding
De Productie/Ontwikkeling van het Vaccin
De Studies van de Ontruiming van het Virus
De Reiniging van het Virus
Bacteriofaag-gebaseerde Bescherming MRSA - Phage Therapie
De Parameters van de Meting
De Types van Virus

Inleiding

Een nieuw laser-based systeem van de nanoparticle volgend analyse is nu beschikbaar wat nanoscale deeltjes zoals virussen en viruscomplexen direct en individueel in vloeistoffen in real time toelaat worden gevisualiseerd, waaruit high-resolution de distributieprofielen van de deeltjesgrootte kunnen worden verkregen.

De techniek is snelle, robuuste, nauwkeurige en lage kosten die een aantrekkelijk alternatief vertegenwoordigt of vult aan bestaande methodes van nanoparticleanalyse zoals zich het Dynamische Lichte Verspreiden (DLS), de Spectroscopie van de Correlatie van het Foton (PCS) of Elektronenmicroscopie aan (EM).

Door de verspreidingscoëfficiënt van individuele deeltjes gelijktijdig en direct te meten, staat de specifieke het Volgen Nanoparticle (NTA) de softwarereeks van de Analyse uniek de gebruiker toe om de virussen en de complexen in een steekproef automatisch te tellen en te rangschikken. De Resultaten worden getoond als grafieken van grootte tegen telling van individuele deeltjes (of grootte versus relatieve helderheid). Deze overwint de deeltje-door-deeltje benadering de beperkingen inherent aan andere systemen van de deeltjesanalyse die slechts gemiddelde de distributiegegevens van de deeltjesgrootte produceren.

Figuur 1. Typisch die virusbeeld door het instrument NanoSight wordt veroorzaakt.

Figuur 2. 3-dimensionaal perceel van deeltjesgrootte versus relatieve deeltjesintensiteit versus deeltjestelling.

De Productie/Ontwikkeling van het Vaccin

De Virale vaccinvoorbereidingen moeten worden bewezen (bevestigd) om zowel stabiel te zijn als bekende aandelen actieve elementen te bevatten. NanoSight staat een directe en directe schatting van productzuiverheid en concentratie toe.

Op Dezelfde Manier kunnen de graad en het tarief van vorming van complexen in een virusvoorbereiding eenvoudig worden geschat gebruikend NanoSight toestaand de fabrikant om betere product productieprocessen te ontwikkelen en producthoudbaarheidsperiode te optimaliseren.

Aangezien NanoSight alle deeltjes in de voorbereiding om toelaat worden gevisualiseerd en worden gerangschikt, wordt de extra informatie over nanoparticleinhoud ter beschikking gesteld in een kortere tijd dan door de conventionele bioanalyses van TCid50 of van de plaque beschikbaar zou zijn.

Bijvoorbeeld, kon de aanwezigheid van grotere deeltjes (die NanoSight zowel kan rangschikken als telling) of niet viraal celpuin van het procédé van de celcultuur of complexen van virusdeeltjes vertegenwoordigen die vele individuele virions bevatten. In één van beide geval, vertegenwoordigen dergelijke complexen/verontreinigende stoffen een mogelijk probleem aan de fabrikant, die onmiddellijk met het systeem kan worden geïdentificeerd NanoSight.

De Studies van de Ontruiming van het Virus

De ontruiming van het Virus wordt geanalyseerd (bevestigd) met hoge titeraren van virussen (van diverse types afhankelijk van toepassing). Deze worden dan gebruikt om processtappen uit te dagen die als ontruimingsstap moeten worden gekwalificeerd.

De gegevens moeten met het zuivere, niet-bijeengevoegde materiaal van de virusaar worden verkregen dat eerst moet bij hoge titer worden voorbereid en v3o3or gebruik als aar worden opgeslagen. NanoSight wordt ideaal gezien geplaatst om het vóór en na beide statuut van samenvoeging te vestigen opslag.

De Reiniging van het Virus

De capaciteit van NanoSight de graad snel om te vestigen waaraan een virusvoorbereiding verontreinigende stoffen of complexen bevat is en de niveaus van zulke te kunnen kwantificeren onschatbaar gebleken om ontwikkelaars te verwerken geinteresseerd in het optimaliseren van reinigingsprotocollen voor virusvoorbereiding.

Bijvoorbeeld, toont Figuur 3 het verschil tussen een gedeeltelijk gezuiverde virusvoorbereiding (witte lijn) en de zelfde steekproef die met succes door een efficiënt reinigingsprotocol heeft overgegaan dat effectief al verontreiniging of het bijeengevoegd materiaal (rode lijn) verwijderde. Merk op dat de verticale as deeltjesconcentratie (virus particles/ml) vertegenwoordigt.

 

Figuur 3. Bedekte de distributiepercelen van de deeltjesgrootte van een virusvoorbereiding vóór (wit) en na (rood) een definitieve reinigingsstap.

Bacteriofaag-gebaseerde Bescherming MRSA - Phage Therapie

De het deeltjesopsporing van het Virus en het tellen gebruikend NTA verstrekken essentiële informatie voor onderzoekers bij de Universiteit van het Instituut van Strathclyde van Apotheek en Biomedische Wetenschappen (IPBS). Dit team ontwikkelt methodes - het voorkomen bacteriën om MRSA natuurlijk aan te wenden te bestrijden.

MRSA (of Methicillin de Bestand goudhoudende Stafylokok -) zijn een variatie van de goudhoudende bacterieStafylokok - wat weerstand die tegen de meeste antibiotica ontwikkeld heeft het moeilijk maakt te behandelen en potentieel doods. Terwijl „Superbug“ met detergentia kan worden gedood, zijn detergent verdunning en de toepassing vaak inconsistent en ondoeltreffend, makend de bacteriofaag een aantrekkelijk alternatief leiden.

Het is in het kenmerken van bacteriofaagculturen dat NanoSight binnen een teamlood door Dr. Mike Mattey, erespreker bij IPBS wordt aangewend. Voorafgaand aan het opstellen van bacteriofagen als droog-laag om zeer riskante bacteriële invasieplaatsen (hechtingen, instrumenten en wonden) te beschermen, vergen de culturen karakterisering en hun concentratiebehoeften beoordeling. NanoSight staat het team toe om virale culturen in real time en aan lage kosten snel te bekijken en te rangschikken.

De „karakterisering van virusbevolking vereist beoordeling van samenvoeging in 20 NM - 1.000 NM- waaier“ zegt Dr. Mattey. „NanoSight verstrekt snelle en gemakkelijke kwantitatieve niet mogelijke steekproefkarakteriseringen met andere methodes en bij veel lagere kosten. Bovendien, verstrekt de technologie van NanoSight een geruststellende mening van de deeltjesbevolking die de tellende resultaten.“ steunt

De Parameters van de Meting

  • De voorbehandeling van de Steekproef is minimaal vereisend slechts verdunning aan 107 - 1010 per ml.

  • De Nauwkeurige en reproduceerbare analyses kunnen uit een tweede analyse worden verkregen 30. De distributie van de Grootte is een aantaldistributie en vandaar kan de steekproefconcentratie worden afgeleid.

  • echt - laten de tijd videoklemmen tijd afhankelijke fenomenen zoals samenvoeging of ontbinding toe om zowel kwalitatief als kwantitatief worden gevolgd. De Veranderingen in zowel grootte als concentratie kunnen in dergelijke processen worden berekend.

  • De minimum opspoorbare meetbare grootte hangt van het deeltjestype maar af meeste virussen en phage types kunnen worden gezien, worden gerangschikt en worden geteld. De absolute grens voor de techniek is 10 NM maar is slechts mogelijk voor hoogst retractile materialen.

  • De techniek is absoluut, vereisend geen kaliberbepaling.

De Types van Virus

Een brede waaier van virustypes is met succes geanalyseerd tot op heden en omvat:

  • Adenovirus
  • Cytomegalovirus (MCMV)
  • Varkens papillomavirus
  • De bacteriofaag van Lambda
  • Vogel griepstimulans (TMV)
  • Het Ratten virus van de Leukemie (MULV)
  • Het Japanse virus van de Hersenontsteking (JEV)
  • Cyanovirus
  • Het Simplex van de Herpes
  • Griep
  • Baculovirus
  • M13
  • M14

Deze informatie is afkomstig geweest, herzien en die van materialen door NanoSight aangepast worden verstrekt.

Voor meer informatie te bezoeken gelieve NanoSight.

Date Added: Dec 22, 2009 | Updated: Mar 7, 2013

Last Update: 7. March 2013 07:46

Ask A Question

Do you have a question you'd like to ask regarding this article?

Leave your feedback
Submit