Visualisation, Cola e Contagem dos Vírus e dos Fago na Suspensão Líquida Usando a Análise de Seguimento do Nanoparticle

Por AZoNano

Assuntos Cobertos

Introdução
Produção/Revelação Vacinais
Estudos do Afastamento do Vírus
Purificação do Vírus
Protecção Bacteriófago-Baseada de MRSA - Terapia do Fago
Parâmetros da Medida
Tipos do Vírus

Introdução

Um nanoparticle baseado no laser novo que segue o sistema de análise está agora disponível que permite que as partículas do nanoscale tais como vírus e agregados do vírus para visualizar directamente e individualmente nos líquidos no tempo real, de que os perfis de alta resolução da distribuição de tamanho da partícula podem ser obtidos.

A técnica é custo rápido, robusto, exacto e baixo que representam uma alternativa atractiva ou um complemento aos métodos existentes da análise do nanoparticle tais como a Dispersão de Luz Dinâmica (DLS), Espectroscopia da Correlação do Fotão (PCS) ou Microscopia de Elétron (EM).

Por simultaneamente e directamente medindo o coeficiente de difusão de partículas individuais, o Nanoparticle dedicado que Segue o conjunto de software (NTA) da Análise permite excepcionalmente que o usuário automaticamente conte e faça sob medida os vírus e os agregados em uma amostra. Os Resultados são indicados como gráficos do tamanho contra a contagem de partículas individuais (ou do tamanho contra o brilho relativo). Esta aproximação da partícula-por-partícula supera as limitações inerentes a outros sistemas de análise da partícula que geram somente dados médios da distribuição de tamanho da partícula.

Figura 1. imagem Típica do vírus produzida pelo instrumento de NanoSight.

Figura 2. lote 3-Dimensional do tamanho de partícula contra a intensidade relativa da partícula contra a contagem de partícula.

Produção/Revelação Vacinais

As preparações vacinais Virais devem ser provadas (validado) ser estábulo e conter proporções conhecidas de elementos activos. NanoSight permite uma avaliação imediata e directa da pureza e da concentração do produto.

Similarmente, o grau e a taxa de formação de agregados em uma preparação do vírus podem simplesmente ser calculados usando NanoSight permitindo que o fabricante desenvolva processos de manufactura melhorados do produto e aperfeiçoe a vida útil do produto.

Porque NanoSight permite que todas as partículas na preparação sejam visualizadas e feitas sob medida, a informações adicionais sobre o índice do nanoparticle é feita disponível em uma estadia mais curto do que esteja disponível com os bio ensaios convencionais de TCid50 ou de chapa.

Por exemplo, a presença de partículas maiores (que NanoSight pode fazer sob medida e contagem) poderia representar restos de pilha não-virais do processo da cultura celular ou agregados das partículas do vírus que contêm muitos virions individuais. Em qualquer dos casos, tais agregados/contaminadores representam um problema possível ao fabricante, um que pode imediatamente ser identificado com o sistema de NanoSight.

Estudos do Afastamento do Vírus

O afastamento do Vírus é analisado (validado) com pontos altos do titre dos vírus (de vários tipos segundo a aplicação). Estes são usados então para desafiar as etapas do processo que precisam de ser qualificadas como uma etapa do afastamento.

Os dados devem ser obtidos com material puro, não-agregado do ponto do vírus que deve primeiramente ser preparado no titre alto e ser armazenado antes de usar como o ponto. NanoSight é colocado idealmente para estabelecer o estado da agregação ambos antes e depois do armazenamento.

Purificação do Vírus

A capacidade de NanoSight para estabelecer ràpida o grau a que uma preparação do vírus contem contaminadores ou agregados e para poder determinar os níveis de tais provou inestimável processar os reveladores interessados em protocolos o aperfeiçoamento da purificação para a preparação do vírus.

Por exemplo, Figura 3 mostra a diferença entre uma preparação parcialmente refinada do vírus (linha branca) e a mesma amostra que está sendo passada com sucesso com um protocolo eficiente da purificação qual removeu eficazmente toda a contaminação ou material agregado (linha vermelha). Note que a linha central vertical representa a concentração da partícula (vírus particles/ml).

 

Figura 3. Cobriu lotes da distribuição de tamanho da partícula de uma preparação do vírus antes (branco) e após (vermelho) de uma etapa final da purificação.

Protecção Bacteriófago-Baseada de MRSA - Terapia do Fago

A detecção da partícula do Vírus e a contagem usando NTA estão fornecendo a informação essencial para pesquisadores na Universidade do Instituto de Strathclyde da Farmácia e das Ciências Biomedicáveis (IPBS). Esta equipe desenvolve métodos para empregar as bactérias naturais para combater MRSA.

MRSA (ou Estafilococo Resistente da Meticilina - áureo) são uma variação do Estafilococo da bactéria - áureo que desenvolveu a resistência à maioria de antibióticos que fazem a difícil tratar potencial inoperante e. Enquanto o “Superbug” pode ser matado com detergentes, a diluição e a aplicação detergentes são frequentemente incompatíveis e ineficazes, fazendo o bacteriófago distribuir uma alternativa atractiva.

Consiste em caracterizar as culturas que NanoSight está empregado dentro de um chumbo da equipe pelo Dr. Mike Mattey, conferente honorário do bacteriófago em IPBS. Antes dos bacteriófagos de distribuição como um seco-revestimento para proteger locais bacterianos de alto risco da invasão (suturas, instrumentos e feridas), as culturas precisam a caracterização e sua concentração precisa de avaliar. NanoSight permite que a equipe ver e faça sob medida culturas virais ràpida no tempo real e a um baixo custo.

“A caracterização de populações do vírus exige a avaliação da agregação nos 20 nanômetro - a escala de 1.000 nanômetro” diz o Dr. Mattey. “NanoSight fornece as caracterizações quantitativas rápidas e fáceis da amostra nao possíveis com outros métodos e em um muito mais barato. Adicionalmente, a tecnologia de NanoSight fornece uma opinião da tranquilidade da população da partícula que apoia os resultados de contagem.”

Parâmetros da Medida

  • O pré-tratamento da Amostra é mínimo exigindo somente a diluição a 107 - 1010 pelo ml.

  • As análises Exactas e reprodutíveis podem ser obtidas de uma segundo análise 30. A distribuição de Tamanho é uma distribuição do número e daqui a concentração da amostra pode ser derivada.

  • os videoclip do tempo real permitem a hora fenômenos dependentes tais como a agregação ou a dissolução de ser seguido qualitativa e quantitativa. As Mudanças no tamanho e na concentração podem ser calculadas em tais processos.

  • O tamanho detectável mínimo mensurável depende do tipo da partícula mas a maioria vírus e de tipos do fago podem ser vistos, feito sob medida e contado. O limite absoluto para a técnica é 10 nanômetro mas é somente possível para materiais altamente retractile.

  • A técnica é absolute, não exigindo nenhuma calibração.

Tipos do Vírus

Uma vasta gama de tipos do vírus foi analisada com sucesso até agora e inclui:

  • Vírus Adenóide
  • Cytomegalovirus (MCMV)
  • Papillomavirus Suíno
  • Fago do Lambda
  • Estimulante da gripe Aviária (TMV)
  • Vírus Murine da Leucemia (MULV)
  • Vírus de Encefalite Japonesa (JEV)
  • Cyanovirus
  • Palavra Simples de Herpes
  • Gripe
  • Baculovirus
  • M13
  • M14

Esta informação foi originária, revista e adaptada dos materiais fornecidos por NanoSight.

Para mais informação visite por favor NanoSight.

Date Added: Dec 22, 2009 | Updated: Mar 7, 2013

Last Update: 7. March 2013 07:48

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