Compte, Calibrage et Totalisation de Visualisation en Protéines Utilisant l'Analyse de Cheminement de Nanoparticle

Par AZoNano

Sujets Couverts

Introduction
Agrégats de Protéine de Représentation
Couvrir la Classe de Grandeur d'Agrégat de Protéine
Sous-marin 30 Agrégats de nanomètre
Domaine de 30 - de 1000 nanomètre

Introduction

La Caractérisation de la condition de la totalisation en protéines est d'importance primordiale en essayant de comprendre la stabilité et l'efficacité de produit. La Qualité des produits, en termes de boîte d'activité biologique et d'immunogénicité, soit hautement influencée par la condition de la totalisation de protéine. La totalisation de Protéine peut se produire à toutes les phases dans le processus de fabrication (culture cellulaire, purification et formulation) et par conséquent, en déterminant la condition de la totalisation, la modification/optimisation du procédé peut être réalisée.

Un nanoparticle basé sur le laser neuf cheminant le système d'analyse est maintenant disponible qui permet des particules de nanoscale, telles que la protéine totalise, concevoir directement et individuellement et compter dans le liquide en temps réel, de l'où des profils à haute résolution de distribution de dimension particulaire peuvent être obtenus. La technique est rapide, robuste, précise et coût bas représentant une alternative séduisante ou un complément aux méthodes existantes d'analyse de nanoparticle telles que la Dispersion de la Lumière Dynamique, DLS (également connu sous le nom de Spectroscopie de Corrélation de Photon, PCS) ou Microscopie Électronique (EM).

Agrégats de Protéine de Représentation

L'instrument de NanoSight offre la seule analyse dans la totalisation de protéine de l'ordre de 30 nm-1000 nanomètre.

Le Schéma 1. Une image typique a produit par la technique de NanoSight. L'image permet aux utilisateurs d'identifier immédiatement certaines caractéristiques techniques au sujet de leur échantillon.

Le Schéma 2. distribution de dimension particulaire (Distribution de numéro) produite à partir de l'échantillon représenté sur le Schéma 1.

Couvrir la Classe de Grandeur d'Agrégat de Protéine

Historiquement un certain nombre de techniques ont été employées pour caractériser des protéines et la totalisation de protéine. Souvent des techniques de séparation sont employées pour distinguer des protéines et des agrégats de protéine, avec l'analyse approfondie exécutée sur un échantillon séparé.

Techniques Analytiques :

Techniques de Séparation :

  • Chromatographie d'Exclusion de Taille (SEC)
  • Fractionnement de Flux de Zone (FFF)
  • Électrophorèse Capillaire. (CE)
  • Ultracentrifugation Analytique (AUC)

Sous-marin 30 Agrégats de nanomètre

Il est commun pour trouver SEC appareillée avec DLS, MAILS ou spectroscopie UV. La Chromatographie d'Exclusion de Taille peut être employée pour séparer des monomères de protéine des agrégats. L'analyse Ultérieure utilisant DLS par exemple, peut produire l'analyse précise de taille/poids moléculaire pour les fractions épurées. Au-dessus de la limite d'exclusion du fléau de SEC il n'y a aucune séparation et par conséquent entasse en vrac des systèmes d'analyse tels que DLS deviennent moins bien adapté. L'analyse de MAILS peut aider à réduire l'effet de plus grands agrégats dans les échantillons non-fractionnés mais la technique exige la traduction.

Domaine de 30 - de 1000 nanomètre

La technique de NanoSight permet à des agrégats de protéine dans la classe de grandeur de 30 - 1000 nanomètre d'être individuellement imagés et classés en cheminant leur mouvement Brownien sur une base de particule-par-particule. l'analyse de Particule-par-Particule permet à des distributions de haute résolution de numéro d'être produites. Cette région souvent est mauvais servie par DLS avec la forte concentration de monomère de protéine et le nombre peu élevé de grands, lumineux agrégats dominant souvent le signe.

Tandis Que le fractionnement peut être exécuté comme avec FFF à l'analyse de l'aide DLS, la dilution qui est souvent exigée pour FFF peut rendre cet undesirable d'artère dû au potentiel pour davantage de totalisation. En Outre, la dilution de ces agrégats « de taille moyenne » les prend souvent ci-dessous la limite de sensibilité pour DLS. La technique de Nanosight n'exige fréquemment aucune dilution pendant que les 30-1000 agrégats de protéine de nanomètre font partie souvent de la marge de concentration optima pour cette technique.

La limite découpée de la technique de NanoSight (30 nanomètre pour des agrégats de protéine) signifie qu'elle est bien adaptée pour compléter SEC/DLS ou SEC/UV au-dessus de la limite d'exclusion de SEC. La limite supérieure de la technique de NanoSight représente la remarque à laquelle les techniques uniques conventionnelles de représentation/occultation de particules deviennent applicables.

Sans la séparation antérieure des agrégats, DLS produirait type un résultat bimodal pour l'échantillon totalisé représenté sur le Schéma 3. La crête primaire par formé de le grand nombre de particules monomériques, alors que la crête secondaire serait constituée par les agrégats très grands qui dispersent des intensités significatives de la lumière. Une analyse mauvais resolved de DLS afficherait que particule entre ces remarques en dépit de leur existence comme particules monomériques primaires et les quelques plus grands agrégats ne dominerait pas le signe.

Le Schéma 3. Image a produit par l'instrument de Nanosight LM10-HS montrant un échantillon fortement totalisé de protéine.

Tandis Que la technique de NanoSight ne pourrait pas mesurer la taille monomérique primaire car les particules tomberaient ci-dessous la limite de détection de la technique, au-dessus de 30 nanomètre, la technique fournit l'analyse de particule-par-particule des agrégats de protéine, formant seulement une distribution à haute résolution de numéro des particules totalisées.

Le Schéma 4. Une représentation de la distribution des dimensions des particules qui peuvent être contenues dans un échantillon totalisé de protéine.

Cette information a été originaire, révisée et adaptée des matériaux fournis par NanoSight.

Pour plus d'information visitez s'il vous plaît NanoSight.

Date Added: Dec 22, 2009 | Updated: Mar 7, 2013

Last Update: 7. March 2013 09:27

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