Räkna, Storleksanpassa och Visualisera Aggregation i Proteiner genom Att Använda NanoparticleSpårningAnalys

Vid AZoNano

Täckte Ämnen

Inledning
Avbilda ProteinAggregat
Täcka ProteinAggregat Storleksanpassa Spänner
Sub 30 nm-Aggregat
30 - 1000 nm Spänner

Inledning

Att Karakterisera det statligt av aggregation i proteiner är av paramount betydelse, när det är pröva för att förstå produktstabilitet och effektivitet. Den kvalitets- Produkten, både benämner in av biologisk aktivitet, och immunogenicitycanen, påverkas högt av det statligt av proteinaggregation. Proteinaggregation kan uppstå alls kliver i det fabriks- processaa (den cellkultur, purification och utformningen), och hence, genom att bestämma det statligt av aggregation, kan ändring/optimisation av det processaa uppnås.

Ett nytt laser-baserat system för nanoparticlespårninganalys är tillgängligt, som låter nanoscalepartiklar, liksom protein samlar nu, för att vara direkt, och individuellt visualiserat och räknat i flytande i real-time, som partikeln med hög upplösning storleksanpassar från, profilerar fördelning kan erhållas. Tekniken är fastar, robustt, exakt, och lågt kosta att föreställa ett attraktivt alternativ eller ett komplement till existerande metoder av nanoparticleanalys liksom Dynamisk Ljus Spridning, DLS (också som är bekant som FotonKorrelationSpektroskopin, PCS) eller ElektronMicroscopy (EM).

Avbilda ProteinAggregat

NanoSighten instrumenterar unik inblick för erbjudanden in i proteinaggregation i spänna av 30 nm-1000 nm.

Figurera 1. Ett typisk avbildar producerat av den NanoSight tekniken. Avbilda låter användarena ögonblickligen känna igen bestämda särdrag om deras tar prov.

Figurera 2. Partikeln storleksanpassar fördelning (numrera fördelning) som produceras från ta prov som in visas, Figurerar 1.

Täcka ProteinAggregat Storleksanpassa Spänner

Historically har ett nummer av tekniker varit van vid karakteriserar proteiner och proteinaggregation. Ofta är avskiljandetekniker van vid diskriminerar proteiner, och proteinaggregat, med mer ytterligare analys som utförs på avskild, tar prov.

Analytiska Tekniker:

AvskiljandeTekniker:

  • Storleksanpassa UteslutandeChromatography (SEC)
  • Sätta In FlödesFractionationen (FFF)
  • CapillaryElectrophoresis. (CE)
  • Analytisk Ultracentrifugation (AUC)

Sub 30 nm-Aggregat

Den är vanligt att finna SEKUND som paras med DLS, GALLERIER eller UV spektroskopi. Storleksanpassa UteslutandeChromatography kan vara van vid separata proteinmonomers från aggregat. Följande analys genom att använda DLS for example, kan jordbruksprodukter som exakt att storleksanpassa/som är molekylärt, väger analys för renat del. Ovanför uteslutandet begränsa av SEKUNDEN som kolonnen där är inget avskiljande och bulk hence analyssystem liksom DLS blir mindre väl - som är anpassat. GALLERIAanalys kan hjälpa att förminska verkställa av större aggregat, i non-fractionated, tar prov, men tekniken kräver tolkning.

30 - 1000 nm Spänner

Den NanoSight tekniken låter proteinaggregat inom storleksanpassa spänner av 30 - 1000 nm som ska avbildas och storleksanpassas individuellt, genom att spåra deras Brownian, vinkar på enpartikel bas. Partikel-vid-Partikeln analys låter kickupplösning numrerar fördelningor som ska frambrings. Denna region är ofta dåligt betjänad av DLS med kickkoncentration av proteinmonomeren och numrerar low av stora ljusa aggregat som dominerar ofta signalera.

Stundfractionationen kan utföras liksom med FFF till analys för medhjälparen DLS, förtunningen som krävs ofta för FFF kan göra denna ruttundesirable tack vare det potentiellt för mer ytterligare aggregation. Dessutom tar förtunningen av dessa ”mitt--storleksanpassade” aggregat dem som är nedanföra känsligheten ofta, begränsar för DLS. Den Nanosight tekniken kräver vanligt ingen förtunning, som för proteinaggregat för 30-1000 nm nedgången inom optimalkoncentrationen spänner ofta för denna teknik.

Snittet begränsar av av hjälpmedlet för NanoSight teknik (30 nm för proteinaggregat) att det är väl - passat för att komplettera SEC/DLS eller SEC/UV ovanför uteslutandet begränsa av SEKUND. Upperen begränsar av den NanoSight tekniken föreställer peka som konventionella tekniker för singelpartikelför avbilda/obscuration blir tillämpbara på.

Med inget föregående avskiljande av aggregat DLS skulle typisk jordbruksprodukter som ett bimodal resultat för samlad tar prov visat in Figurerar 3. Skulle det primära maximalt by bildat från stort nummer av monomeric partiklar, fördriver skulle det sekundära maximalt bildas av mycket stora aggregat som sprider viktiga styrkor av ljust. En dåligt löst skulle show för DLS analys inga partiklar mellan dessa pekar illvilja deras existens som de primära monomeric partiklarna, och de skulle få större aggregaten dominerar signalera.

Figurera 3. Image producerade vid Nanosight LM10-HS instrumenterar visning som ett tungt samlat protein tar prov.

Stunden den skulle NanoSight tekniken är oförmögen att mäta det primära monomeric storleksanpassar, som partiklarna skulle den nedanföra nedgången upptäckten begränsar av tekniken, ovanför 30 nm, tekniken ger partikel-vid-partikeln analys av proteinaggregat som bildar unikt ett med hög upplösning, numrerar fördelning av samlade partiklar.

Figurera 4. En framställning av fördelningen av partikeln storleksanpassar som kan innehållas inom ett samlat protein tar prov.

Denna information har varit sourced, granskad och anpassad från material förutsatt att av NanoSight.

För mer information behaga besök NanoSight.

Date Added: Dec 22, 2009 | Updated: Mar 7, 2013

Last Update: 7. March 2013 09:29

Ask A Question

Do you have a question you'd like to ask regarding this article?

Leave your feedback
Submit