Maliit na Anggulo ng X-Ray Scattering ng mga Proteins gamit ng S3-Micro SAXS Camera mula Hecus

Paksa sakop

Panimula
Ano ang SAXS / SWAXS?
Pangkalahatang-ideya
Pagsubok
Mga Resulta
Konklusyon

Panimula

Hecus X-Ray Systems , na itinatag sa 1992, ay ayon sa kaugalian specialized sa mga makabagong mga solusyon ng sistema para sa analytics ng X-Ray nanostructure. Ang malakas na tumutok sa mga maliit na anggulo na X-ray na pamamaraan - ang Otto-Kratky pamana - nagsisilbing isang malawak na komunidad ng mga mananaliksik at mga inhinyero, na kailangan ng mga SAXS at kaugnay na mga pamamaraan ng praktikal at maaasahang mga kasangkapan sa kanilang mga hamon laboratoryo pagsasanay, at na nais na gamitin ang pamamaraan regular.

Ano ang SAXS / SWAXS?

Maliit at Wide-Anggulo X-ray Scattering (S / WAXS) ay di-nagsasalakay analytical pamamaraan upang siyasatin ang istraktura ng mga di-mala-kristal o bahagyang mala-kristal na mga materyales. Pareho ang pinaka-o macromolecular domain pati na rin ang interatomic distansya sa maliit na molecule o kristal ay sinisiyasat.

Patlang ng Application:

• Polymers
• Liquid Kristal
• Powders & Cream Formulations
• Biopolymers
• Biomaterials
• Catalysts
• Nanomaterials
• Coatings & pelikula

Pangkalahatang-ideya

Maliit na anggulo ng X-ray scattering ng proteins - o ng mga nanoparticles sa pangkalahatan - sa solusyon ay napatunayan na maging isang mahalagang paraan para sa kanilang (nano) istruktura paglalarawan at parameterization tulad ng laki at hugis. Ang pinaka-kilalang parameter ay radius ang mumo ng biling Rg, ang isang halaga na may kaugnayan sa ang laki ng tinga at na maaaring madaling nahango mula sa panloob na bahagi ng isang curve SAXS:

Ko (q) ~ ko (0) * exp (-q ² * R _g ² / 3) (1)

sa ko na ang kalat kasidhian mula sa sample, q ang gantihan vector scattering (na may kaugnayan sa scattering anggulo 2θ) at ako (0) ang extrapolated kasidhian sa anggulo zero. Ang kaugnayan sa pagitan ng q (gantihan mga panukat na ^yunit ng, ^nm -1 o isang -1) at 2θ (°, anggular unit) ay ibinigay sa pamamagitan ng q = 4π (sinθ) / λ, sa 2θ pagiging scattering anggulo na may paggalang sa sinag pangyayari at λ ang haba ng daluyong sa nm o ng ginamit na X-ray na ngiti.

Pagsubok

Isang solusyon ng protina na inihanda sa pamamagitan ng dissolving ang lyophilized pulbos ng ng protina ng baka (suwero) puti ng itlog (BSA mula sa Sigma kemikal, St.Louis, MO) sa 10 mm PBS-buffer (ph = 8.0). Ang huling concentration ay 15 mg / ML (1.5%). Maliit na-anggulo X-ray scattering (SAXS) mga sukat ng protina solusyon na ito at ang kani buffer ay natupad sa isang HECUS S3 -Micro SAXS camera nakalakip Xenocs microbeam paghahatid ng system (Ta-target, weyblengt λ = 1.54 A at FOX3D -optika ), operating sa isang kapangyarihan ng 50 W. Ang vertical maglaslas ng pasukan ng siwang ay naka-set sa 200 μm na nagreresulta sa isang pakilusin ng ^1.5 * 10 7 photons / s. Ang mga likido halimbawa ay napuno sa kuwarts capillaries ng 1 mm diameter at sinusukat sa 20 ° C para sa karaniwang 2000 s. Bago ang sukat ng kamag-anak pangunahing kasidhian ng ngiti at ang X-ray na pagpapadala ng ang halimbawa ay sinusukat sa isang pin-diode. Ang SAXS-pattern ang naitala sa isang linear 1D detector posisyon sensitive (1024 pixels na may 54 μm pixel-lapad) sa loob ng isang q-saklaw hanggang ^sa 0.6 A -1. Ang insidente ng pangunahing sinag ay hinarangan ng isang motorized madaling iakma beamstopper (2 mm W) na matatagpuan sa harap ng detector. Pagkakalibrate ng q-scale (convert pixel na halaga sa mga q-halaga) ay tapos na may pulbos AG-behenate na kung saan ay may isang calibrated d-espasyo ng 58.38 A. Raw data processing ng sa mga curves ng scattering (background pagbabawas pagkatapos normalizing) ay tapos na sa ang pangunahing pagsusuri ng data programa EasySWAXS ( HECUS) at maproseso ang data ay pagkatapos nasuri sa programa ng pakete ATSAS 2.3 . (D. Svergun, EMBL, Hamburg).