NanoSight からの Nanoparticle の追跡の分析を使用して Exosomes の直接視覚化、サイジング (NTA)およびカウント

AZoNano 著

カバーされるトピック

導入
Exosomes を検出し、数えます
代わりとなる技術
測定の選択率
概要

導入

また exosomes (30-100nm) と呼出された Microvesicles (普通 1um 範囲への 100nm で) および nanovesicles は、細胞残骸であると最初に信じられました。 ただしこれらのセル得られた粒子が重要な重要性をもち、セル通信連絡およびセル信号を送ることにセルの両方重要な役割を担うこと今感謝されています。

重要性は最近それらは冠動脈疾患、炎症性病気、前子癇、糖尿病および癌を含むいくつかの病気の条件のかなり上昇値であることが検出されてから認識されるようになってしまいました。 これは biomarkers として病因に於いての直接役割、また可能な使用の質問を上げます。

そのような状況では、 exosomes は microvesicles が間これらの粒子の形成のプロセス今でも討論のトピックであるよりかなり高頻度に普通あり、高い濃度がより早く、より敏感な検出の点では潜在的な重要性のこれらの小粒子の性格描写を作る。

NanoSight はどの高解像の粒度分布のプロフィールがから (NTA)得ることができるか特定の microsomal および exosome 粒子がリアルタイムの液体で直接そしてそれぞれ視覚化するためにおよび数えられてし、解析システムを追跡する新しいレーザーベースの Nanoparticle を提供します。

技術は使いやすく、速く、強く、正確費用有効で、魅力的な選択枝か補数、電子顕微鏡検査またはダイナミックな光散乱、 DLS (別名光子の相関関係の分光学、 PCS) 流れ Cytometry のような nanoparticle の分析の既存の方法に表します。

Exosomes を検出し、数えます

NanoSight の器械は 50nm - 1000nm の範囲で exosomes に一義的な洞察力を提供します。

技術は多目的であり、普通簡単な希薄はサンプルで現在の粒子の集中を測定して十分です。 最初にサンプルはユーザーが急速に見られる小胞の高リゾリューションの粒度分布のプロフィールそしてカウントを (絶対個数濃度の点では) 生成できる集約された物質的な (図 1a) 続くまたはより大きい粒子ことの存在のために目で見て確認することができます (図 1b)。

薄くされた血小板なしの血しょうの図 1. サンプル。 A) NanoSight の技術によって作り出される典型的な画像。 画像はユーザーが直ちに polydispersity の集中そしてレベルを含む彼らのサンプルについてのある特定の機能を認識することを可能にします。 B) サンプルからの粒度分布そして計算された元の集中。

代わりとなる技術

従来、いくつかの技術がマイクロによって大きさで分類される粒子に使用できるより多くの技術の microvesicles そして nanovesicles を特徴付けるのに使用されていました。

解析技法:

おそらくこれらの共通は流れ cytometry です。 典型的な商業流れ cytometry に 300nm のまわりでのより低いサイズの限界がありますその時点でシグナルはベースラインの騒音レベルから識別不可能です。 この検出限界が蛍光ラベルの使用と拡張することができる間、より低いサイズで正確にそのような粒子を大きさで分類する機能はひどく限られています。

ダイナミックな光散乱は (DLS)またこのアプリケーションで使用されましたが、アンサンブルの測定で、結果は簡単な z 平均 (重くされる強度) 粒度および polydispersity または限られ解像度の粒度分布のプロフィール非常にから成り立ちます。 重大に、粒子の集中情報は使用できないし、 DLS は蛍光分類された粒子を測定できません。

電子顕微鏡検査はマイクロ調査のためのおよび nanovesicles しかしサンプル準備の後の重要な、運営費用、サンプル準備およびスループット時間およびサンプル保全を犠牲にする有用な研究のツールです。

測定の選択率

ある特定のサイズまたはサイズの範囲の粒子はサンプルにあるかどうかただ定めるために頻繁に十分である間、頻繁にサンプル内の粒子の特定の副人口を識別し、区別することは大いに重要です。 例えば NanoSight の技術は選択式にそのような人口を抗体仲介された蛍光分類の使用を分析することができます。 このアプローチはユーザーが蛍光分類された抗体が結合する特定の nanoparticles だけ、適切な光フィルタの使用によって除かれる背景の無指定の微粒子検出し、分析し、数えることを可能にします。 fluorophores の範囲は使用することができる間、最もよい結果のための高性能、安定性が高い量の点 (QDot®) のラベルを用いることは有利です。

これは青い半導体レーザーによって合う NanoSight の器械によって刺激される量の点から出る蛍光性ライトの単一のビデオフレームを示す図 2A で示されます。 これらの量の点が抗体 (syncytiotrophoblast の microvesicle (STBM) のターゲット biomarker への NDOG II) の細目を分類するのに使用されました。

STBM の粒子に抗体によって接続する量の点からの図 2. A) 蛍光性の画像。 B) 分散させたライト (青い)、正しい抗体 (赤い) および不正確な (制御) 抗体 (緑) からの粒度分布。 個数濃度の垂直軸線に注意して下さい。

2B ショー 3 のサイズ分布の提示を計算して下さい: i) ii) 粒子蛍光 QDot 分類された NDOG II の抗体とりわけ区切た蛍光性のモード (赤線) の下で測定として (非螢光性の) ライト分散によって検出される STBM のサンプル (ブルーライン) で現在のすべての粒子および iii) 親和性無しで STBM のターゲット biomarker に同様に分類された QDot 分類された抗体を構成する制御 (グリーン・ライン) (また蛍光性のモードで測定される)。 これはサンプルで STBM 特定の Q 点NDOG II の抗体によって現在の粒子の大半が正常にそしてとりわけ分類されたこと、そして制御が正常に非常に低いシグナルを示したことを示します。

概要

NanoSight の技術は正常に大きさで分類し、低い集中で microvesicles および exosomes を両方および数えることは、蛍光ラベルと共に使用されたとき、選択式に特定のタイプの複雑なサンプル内の粒子を定め、分析できます。

この情報は NanoSight によって提供される材料から供給され、見直され、そして適応させて。

より多くの情報のために NanoSight を訪問して下さい。

Date Added: Oct 17, 2010 | Updated: Mar 7, 2013

Last Update: 7. March 2013 11:33

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