Het Directe Visualisatie, Rangschikken en Tellen van Exosomes Gebruikend het Volgen Nanoparticle Analyse (NTA) van NanoSight

Door AZoNano

Besproken Onderwerpen

Inleiding
Het Ontdekken en het Tellen Exosomes
Alternatieve Technieken
Selectiviteit van Meting
Samenvatting

Inleiding

Microvesicles (typisch in de 100nm tot 1um waaier) en nanovesicles, ook geroepen exosomes (30100nm) werd, aanvankelijk verondersteld om cellulair puin te zijn. Nochtans waardeert men nu dat deze cel-afgeleide deeltjes van significant belang zijn en een belangrijke rol zowel in cel aan cel mededeling als cel het signaleren spelen.

Hun belang is onlangs erkend geworden aangezien men ontdekte dat zij op beduidend opgeheven niveaus in een aantal ziektenvoorwaarden met inbegrip van kransslagaderziekte, ontstekingsziekten, pre-eclampsia, diabetes en kanker aanwezig zijn. Dit stelt de kwestie van hun directe rol in pathogenese evenals hun mogelijk gebruik als biomarkers.

In dergelijke omstandigheid, exosomes zijn typisch aanwezig in beduidend hogere aantallen dan microvesicles en terwijl het proces van de vorming van deze deeltjes nog het onderwerp van debat is, maakt hun hogere concentratie de karakterisering van deze kleinere deeltjes van potentieel belang in termen van vroegere en gevoeligere opsporing.

NanoSight biedt een nieuw laser-based Volgend systeem van de Analyse aan (NTA) Nanoparticle dat specifieke microsomal en exosome deeltjes direct en individueel in vloeistof in real time toelaat worden gevisualiseerd en worden geteld en waaruit high-resolution de distributieprofielen van de deeltjesgrootte kunnen worden verkregen.

De techniek is makkelijk te gebruiken, snel, robuust, nauwkeurig en rendabel, vertegenwoordigend een aantrekkelijk alternatief of vult aan bestaande methodes van nanoparticleanalyse aan zoals zich Stroom Cytometry, Elektronenmicroscopie of het Dynamische Lichte die Verspreiden, DLS (ook als de Spectroscopie van de Correlatie van het Foton, PCS wordt bekend).

Het Ontdekken en het Tellen Exosomes

Het instrument NanoSight biedt een uniek inzicht in exosomes in de waaier van 50nm - 1000nm aan.

De techniek is veelzijdig en de normaal eenvoudige verdunning volstaat om de concentratie van deeltjes te meten huidig in de steekproef. Aanvankelijk kan de steekproef visueel voor de aanwezigheid van grotere deeltjes of bijeengevoegd materiaal (Cijfer 1a) worden geïnspecteerd waarna de gebruiker een profiel van de de groottedistributie van het hoge resolutiedeeltje en een telling (in termen van absolute aantalconcentratie) van de gezien blaasjes kan snel produceren (Figuur 1B).

Figuur 1. Steekproef van verdund plaatje-vrij plasma. A) het typische die beeld van A door de techniek NanoSight wordt veroorzaakt. Het beeld staat de gebruikers toe om bepaalde eigenschappen over hun steekproef met inbegrip van concentratie en niveau van polydispersity onmiddellijk te erkennen. B) de groottedistributie van het Deeltje en berekende originele concentratie van de steekproef.

Alternatieve Technieken

Historisch, zijn een aantal technieken gebruikt om microvesicles en nanovesicles met meer technieken te kenmerken die beschikbaar aan de micro gerangschikte deeltjes zijn.

Analytische Technieken:

Waarschijnlijk is het gemeenschappelijkst hiervan cytometry Stroom. Commerciële stroom cytometry typisch heeft een lagere groottegrens van rond 300nm op welk punt het signaal van het basislijngeluidsniveau niet te onderscheiden is. Terwijl deze opsporingsgrens met het gebruik van fluorescente etiketten kan worden uitgebreid, bij lagere grootte is de capaciteit dergelijke deeltjes nauwkeurig om te rangschikken streng beperkt.

Het Dynamische Lichte Verspreiden zich is (DLS) ook gebruikt in deze toepassing maar zijnd een ensemblemeting, bestaan de resultaten of uit een eenvoudige z-gemiddelde (gewogen intensiteit) deeltjesgrootte en polydispersity of een zeer profiel van de de groottedistributie van het beperken-resolutiedeeltje. Cruciaal, is geen informatie van de deeltjesconcentratie beschikbaar en DLS kan geengeëtiketteerde deeltjes meten.

De elektronenmicroscopie is een nuttig onderzoekhulpmiddel om micro en nanovesicles maar ten koste van kapitaal en bedrijfskosten, steekproefvoorbereiding en productietijd en steekproefintegriteit na steekproefvoorbereiding te bestuderen.

Selectiviteit van Meting

Terwijl het vaak adequaat is om slechts te bepalen of de deeltjes van een bepaalde grootte of een groottewaaier in een steekproef aanwezig zijn, is het vaak belangrijker om specifieke sub-bevolkingen van deeltjes te identificeren en te onderscheiden binnen de steekproef. De techniek NanoSight kan dergelijke bevolking door, bijvoorbeeld, het gebruik selectief analyseren van antilichaam-bemiddelde fluorescente etikettering. Deze benadering staat de gebruiker toe om slechts specifieke nanoparticles te ontdekken te analyseren en te tellen waaraan het fluorescently-geëtiketteerde antilichaam bindt, niet-specifieke particulates die als achtergrond door het gebruik van aangewezen optische filters worden uitgesloten. Terwijl een waaier van fluorophores kan worden gebruikt, is het voordelig om high-efficiency, etiketten hoge van de stabiliteits quantumpunt (QDot®) voor beste resultaten aan te wenden.

Dit wordt aangetoond in Figuur 2A die één enkel videodieframe van fluorescentielicht van quantumdiepunten wordt uitgezonden toont met een instrument NanoSight worden opgewekt met een blauwe laserdiode wordt gepast. Deze quantumpunten werden gebruikt om een antilichaam (NDOG II) specifiek te etiketteren voor het doel biomarker heden op een syncytiotrophoblast microvesicle (STBM).

Figuur 2. A) het beeld van de Fluorescentie van quantumpunten in bijlage via antilichaam aan deeltjes STBM. B) de groottedistributies van het Deeltje van verspreid (blauw) licht, correct (rood) antilichaam en onjuist ((groen) controle) antilichaam. Neem nota van de verticale as van de aantalconcentratie.

Kom voor 2B drie groottedistributies toont die tonen: I) alle deeltjes huidig in de steekproef STBM (blauwe lijn) zoals ontdekt door (niet-fluorescerende) lichte verspreiding, ii) de deeltjes waaraan fluorescente QDot-Geëtiketteerde NDOG II antilichaam specifiek had gebonden, als maatregel onder fluorescentiewijze (rode lijn), en iii) een controle die (groene lijn) uit een zo ook geëtiketteerd QDot-Geëtiketteerd die antilichaam zonder affiniteit bestaat aan het doel biomarker op STBM (ook op fluorescentiewijze wordt gemeten). Dit toont aan dat de meerderheid van de deeltjes huidig in de steekproef met succes en specifiek door het STBM-Specifieke antilichaam werd geëtiketteerd q-punt-NDOG II en dat de controle met succes een zeer laag signaal toonde.

Samenvatting

De techniek NanoSight kan beide microvesicles met succes rangschikken en tellen en exosomes bij een lage concentratie en, wanneer gebruikt samen met fluorescente etiketten, kan specifieke types van deeltje selectief bepalen en analyseren binnen een complexe steekproef.

Deze informatie is afkomstig geweest, herzien en die van materialen door NanoSight aangepast worden verstrekt.

Voor meer informatie te bezoeken gelieve NanoSight.

Date Added: Oct 17, 2010 | Updated: Mar 7, 2013

Last Update: 7. March 2013 11:32

Ask A Question

Do you have a question you'd like to ask regarding this article?

Leave your feedback
Submit