Сразу Визуализирование, Загрунтовка и Подсчитывать Exosomes Используя Анализ Nanoparticle Отслеживая (NTA) от NanoSight

AZoNano

Покрытые Темы

Введение
Обнаруживающ и Подсчитывающ Exosomes
Альтернативные Методы
Селективность Измерения
Сводка

Введение

Были поверены, что были Microvesicles (типично в 100nm к ряду 1um) и также вызванные nanovesicles, exosomes (30-100nm), первоначально клетчатыми твердыми частицами. Однако теперь оценено что эти клетк-выведенные частицы значительно важности и играют важную роль и в клетке к связи клетки и сигнализировать клетки.

Их важность недавно была узнанной в виду того что было открыно что они присутствовал на значительно повышенных уровнях в нескольких условий заболеваниями включая заболевание коронарной артерии, воспалительные заболевания, pre-eclampsia, мочеизнурение и рак. Это поднимает вопрос их сразу роли в патогенезе так же, как их возможной пользы как biomarkers.

В таком обстоятельстве, exosomes присутствовал типично в значительно более высоких номерах чем microvesicles и пока процесс образования этих частиц все еще тема дискуссии, их более высокая концентрация делает характеризацию этих более малых частиц потенциальной важности оперируя понятиями более предыдущего и более чувствительного обнаружения.

NanoSight предлагает новый лазер-основанный Nanoparticle Отслеживая Ситему анализа (NTA) которая позволяют специфическим микросомым и exosome частицам сразу и индивидуально визуализировать и подсчитано в жидкости в реальное временя и от которое профили распределения по размеру частицы высок-разрешения можно получить.

Метод легок для использования, быстро, робастно, точно и рентабельно, представляющ привлекательную алтернативу или комплект к существующим методам анализа nanoparticle как Cytometry Подачи, Электронная Микроскопия или Динамический Светлый Разбрасывать, DLS (также известное как Спектроскопия Корреляции Фотона, PCS).

Обнаруживающ и Подсчитывающ Exosomes

Аппаратура NanoSight предлагает уникально проницательность в exosomes в границах 50nm - 1000nm.

Метод разностороннь и нормально простое разбавление достаточно для того чтобы измерить концентрацию частиц присутствующих в образце. Первоначально образец можно визуально проверить для присутсвия более больших частиц или суммированного материального (Диаграмма 1a) следования которым пользователь может быстро произвести высокий профиль распределения по размеру частицы разрешения и отсчет (оперируя понятиями концентрации неименованного числа) увиденных vesicles (Диаграмма 1B).

Диаграмма 1. Образец разбавленной бляшк-свободной плазмы. A) Типичное изображение произведенное методом NanoSight. Изображение позволяет пользователям немедленно узнать некоторые характеристики о их образце включая концентрацию и уровень polydispersity. B) Распределение по размеру Частицы и высчитанная первоначально концентрация от образца.

Альтернативные Методы

Исторически, несколько методов были использованы для того чтобы характеризовать microvesicles и nanovesicles при больше методов имея в распоряжении частицы определенные размер micro.

Аналитически Методы:

Вероятно самое общее этих cytometry Подачи. Коммерчески cytometry подачи типичный имеет более низкий предел размера вокруг 300nm на который этап сигнал неразличим от уровня шума базиса. Пока этот предел обнаружения можно расширить с пользой дневных ярлыков, на более низких размерах способность точно определить размер такие частицы строго лимитирована.

Динамический Светлый Разбрасывать (DLS) также было использован в этом применении но было измерением ансамбля, результаты состоят из или простого z-среднего (утяжеленная интенсивность) размера частицы и polydispersity или очень профиль распределения по размеру частицы лимитированн-разрешения. Критически, никакие данные по концентрации частицы не доступны и DLS не может измерить дневн-обозначенные частицы.

Электронная микроскопия полезный инструмент исследования для изучать микро- и nanovesicles но за счет прописных и идущих цен, времени подготовки образца и объём и герметичности образца после подготовки образца.

Селективность Измерения

Пока оно часто адекватнь для того чтобы определить просто присутствовал ли частицы некоторых размера или ряда размера в образце, часто очень важне определить и различить специфические субпопуляции частиц внутри образец. Метод NanoSight способен выборочно анализировать таких населенностей до конца, на пример, польза антител-посредничанный дневной обозначать. Этот подход позволяет пользователю обнаружить, проанализировать и подсчитать только специфические nanoparticles к которым дневн-обозначенное антитело связывает, particulates предпосылки неспецифичные будучи исключанным через пользу соотвествующих оптически фильтров. Пока ряд fluorophores можно использовать, выгодно использовать высокую эффективность, высокие ярлыки многоточия суммы стабилности (QDot®) для самых лучших результатов.

Это продемонстрировано в Диаграмме 2A на которую показано одиночную видео- рамку света флуоресцирования испущенную от многоточий суммы возбужденных при аппаратура NanoSight приспособленная с голубым лазерным диодом. Эти многоточия суммы были использованы для того чтобы обозначить специфический антитела (NDOG II) к biomarker цели присутствующему на microvesicle syncytiotrophoblast (STBM).

Диаграмма 2. A) Изображение Флуоресцирования от многоточий суммы прикрепленных через антитело к частицам STBM. B) Распределения по размеру Частицы от разбросанного света (голубого), правильного антитела (красного) и неправильного антитела (управления) (зеленого цвета). Заметьте ось вертикали концентрации номера.

Вычисляйте 2B показывать распределений по размеру выставок 3: i) все частицы присутствующие в образце STBM (голубой линии) как обнаружено (non-дневным) scatter света, ii) частицы к которым дневное QDot-обозначенное антитело NDOG II прыгнуло специфически, как измерение под режимом флуоресцирования (красной линией), и III) управление (зеленая линия) состоя из подобно обозначенного QDot-обозначенного антитела без сродства к biomarker цели на STBM (также измеренном в режиме флуоресцирования). Это показывает что большинство частиц присутствующих в образце успешно и специфически было обозначено STBM-специфическим антителом Q-Многоточия-NDOG II и что управление успешно показало очень низкий сигнал.

Сводка

Метод NanoSight может успешно определить размер и подсчитать и microvesicles и exosomes на низкой концентрации и, при использовании совместно с дневными ярлыками, может выборочно определить и проанализировать специфические типы частицы внутри сложный образец.

Эта информация найденный, расмотрена и приспособлена от материалов обеспеченных NanoSight.

Для больше информации пожалуйста посетите NanoSight.

Date Added: Oct 17, 2010 | Updated: Mar 7, 2013

Last Update: 7. March 2013 11:34

Ask A Question

Do you have a question you'd like to ask regarding this article?

Leave your feedback
Submit