直接形象化,大小和计数使用纳米颗粒跟踪的分析的 Exosomes (NTA) 从 NanoSight

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包括的事宜

简介
检测和计数 Exosomes
替代技术
评定选择性
汇总

简介

Microvesicles (典型地在对 1um 范围的 100nm) 和 nanovesicles,也称 exosomes (30-100nm),最初认为是蜂窝电话残骸。 然而现在被感激这些细胞派生的微粒是重大的重要并且扮演重要作用在细胞对细胞通信和细胞发信号。

他们的重要性最近变得识别,自从发现他们是存在显着在一定数量的疾病条件的提高的水平包括冠状动脉病、炎症疾病、子痫前期、糖尿病和癌症。 这提出他们的在发病原理的直接作用以及他们可能的使用的问题作为生物标志。

在这样情况, exosomes 比 microvesicles 和,这些微粒的形成的进程仍然是辩论是典型地存在显着高数量事宜,他们的更高的浓度做这个描述特性这些更小的颗粒潜在的重要根据更早和更加敏感的检测。

NanoSight 提供跟踪在液体在实时 (NTA)允许特定 microsomal 和 exosome 微粒直接地和单个形象化和计数,并且从的分析系统的一新的基于激光的纳米颗粒哪些高分辨率粒度分布配置文件可以获得。

这个技术是易用,快速,稳健,准确和有效的,表示引力选择或补全对纳米颗粒分析现有的方法例如流式细胞术,电子显微镜术或者动态光散射, DLS (亦称光子相关性分光学, PCS)。

检测和计数 Exosomes

NanoSight 仪器提供唯一答案到 exosomes 在 50nm - 1000nm 范围内。

这个技术是多才多艺的,并且通常简单的稀释是满足评定微粒的浓度当前在这个范例。 最初这个范例可以视觉上检查这个用户能迅速地生成高分辨率粒度分布配置文件和计数的出现更大的微粒或被综合的物质 (图 1a) 按照 (根据绝对编号浓度被看见的) 泡 (图 1b)。

图 1. 被稀释的血小板自由的等离子范例。 A) NanoSight 技术导致的一个典型的图象。 这个图象允许用户立刻认可关于他们的范例的某些功能包括多分散性的浓度和级别。 B) 粒度分布和被计算的原始浓度从范例。

替代技术

历史上,一定数量的技术用于分析 microvesicles 和 nanovesicles 与是更多的技术可用的对微小大小的微粒。

分析技术:

很可能最公用这些是流式细胞术。 典型商业的流式细胞术有在 300nm 附近一个更低的范围限额,到时这个信号从草拟噪声级是难区分的。 当此检测极限可以扩大与使用萤光标签时,在更低的范围这个能力准确地估量这样微粒是严重地有限的。

动态光散射 (DLS)也用于此应用,但是合奏评定,结果包括简单的 z 平均 (强度被衡量的) 颗粒大小和多分散性或者一个非常有限解决方法粒度分布配置文件。 关键地,微粒浓度信息不是可用的,并且 DLS 不可能评定萤光被标记的微粒。

电子显微镜术是一个有用的研究工具为学习微型和 nanovesicles,但是牺牲资本和运行费用、范例准备和处理量时间和范例完整性在范例准备之后。

评定选择性

它频繁地是足够的仅仅确定有些范围或范围范围的微粒是否是存在范例,识别和歧视微粒的特定亚人口在这个范例内的经常是更加重要的。 NanoSight 技术能够有选择性分析这样人口通过,例如,使用抗体斡旋的萤光标记。 此途径允许这个用户检测,分析和计数萤光被标记的抗体束缚仅的特定 nanoparticles,通过使用被排除的背景未指明的微粒物质适当的光过滤器。 当可以使用时 fluorophores 的范围,使用最佳的结果的高效率,高稳定性数量小点 (QDot®) 是有利的标签。

这在显示从数量小点散发的荧光光一种唯一电视结构激发与 NanoSight 仪器符合一个蓝色激光二极管的图 2A 被展示。 这些数量小点用于标记抗体 (对目标生物标志的 NDOG II) 特定在 syncytiotrophoblast microvesicle (STBM)。

图 2. A) 从通过抗体附有的数量小点的荧光图象 STBM 微粒。 B) 从分散的光 (蓝色),正确的抗体 (红色) 和不正确 (控制) 抗体 (绿色) 的粒度分布。 注意编号浓度垂直轴。

图 2B 显示三大小分布显示: i) 所有微粒当前在 STBM 范例 (蓝线) 如检测 (非莹光的) 光消散, ii) 的微粒萤光 QDot 被标记的 NDOG II 抗体特别地一定,作为评定在荧光模式 (红线) 下和 iii) 包括类似被标记的 QDot 被标记的抗体的控制 (绿线) 没有亲合力于在 STBM 的目标生物标志 (也评定在荧光模式下)。 这向显示微粒的大部分当前在这个范例是顺利地和特别地由 STBM 特定 Q 小点NDOG II 抗体标记的,并且这个控制顺利地显示了一个非常低信号。

汇总

NanoSight 技术可能顺利地估量,并且计数 microvesicles 和 exosomes 以低浓度和,当使用与萤光标签一道,可能选择性地确定和分析微粒的特定类型在一个复杂范例内的。

此信息是来源,复核和适应从 NanoSight 提供的材料。

对于更多信息请参观 NanoSight

Date Added: Oct 17, 2010 | Updated: Mar 7, 2013

Last Update: 7. March 2013 11:31

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