直接形象化,大小和計數使用納米顆粒跟蹤的分析的 Exosomes (NTA) 從 NanoSight

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包括的事宜

簡介
檢測和計數 Exosomes
替代技術
評定選擇性
彙總

簡介

Microvesicles (典型地在對 1um 範圍的 100nm) 和 nanovesicles,也稱 exosomes (30-100nm),最初認為是蜂窩電話殘骸。 然而現在被感激這些細胞派生的微粒是重大的重要并且扮演重要作用在細胞對細胞通信和細胞發信號。

他們的重要性最近變得識別,自從發現他們是存在顯著在一定數量的疾病條件的提高的水平包括冠狀動脈病、炎症疾病、子癇前期、糖尿病和癌症。 這提出他們的在發病原理的直接作用以及他們可能的使用的問題作為生物標誌。

在這樣情況, exosomes 比 microvesicles 和,這些微粒的形成的進程仍然是辯論是典型地存在顯著高數量事宜,他們的更高的濃度做這個描述特性這些更小的顆粒潛在的重要根據更早和更加敏感的檢測。

NanoSight 提供跟蹤在液體在實時 (NTA)允許特定 microsomal 和 exosome 微粒直接地和單個形象化和計數,并且從的分析系統的一新的基於激光的納米顆粒哪些高分辨率粒度分佈配置文件可以獲得。

這個技術是易用,快速,穩健,準確和有效的,表示引力選擇或補全對納米顆粒分析現有的方法例如流式細胞術,電子顯微鏡術或者動態光散射, DLS (亦稱光子相關性分光學, PCS)。

檢測和計數 Exosomes

NanoSight 儀器提供唯一答案到 exosomes 在 50nm - 1000nm 範圍內。

這個技術是多才多藝的,并且通常簡單的稀釋是滿足評定微粒的濃度當前在這個範例。 最初這個範例可以視覺上檢查這個用戶能迅速地生成高分辨率粒度分佈配置文件和計數的出現更大的微粒或被綜合的物質 (圖 1a) 按照 (根據绝對編號濃度被看見的) 泡 (圖 1b)。

圖 1. 被稀釋的血小板自由的等離子範例。 A) NanoSight 技術導致的一個典型的圖像。 這個圖像允許用戶立刻認可關於他們的範例的某些功能包括多分散性的濃度和級別。 B) 粒度分佈和被計算的原始濃度從範例。

替代技術

歷史上,一定數量的技術用於分析 microvesicles 和 nanovesicles 與是更多的技術可用的對微小大小的微粒。

分析技術:

很可能最公用這些是流式細胞術。 典型商業的流式細胞術有在 300nm 附近一個更低的範圍限額,到時這個信號從草擬噪聲級是難區分的。 當此檢測極限可以擴大與使用螢光標籤時,在更低的範圍這個能力準確地估量這樣微粒是嚴重地有限的。

動態光散射 (DLS)也用於此應用,但是合奏評定,結果包括簡單的 z 平均 (強度被衡量的) 顆粒大小和多分散性或者一個非常有限解決方法粒度分佈配置文件。 關鍵地,微粒濃度信息不是可用的,并且 DLS 不可能評定螢光被標記的微粒。

電子顯微鏡術是一個有用的研究工具為學習微型和 nanovesicles,但是犧牲資本和運行費用、範例準備和處理量時間和範例完整性在範例準備之後。

評定選擇性

它頻繁地是足够的僅僅確定有些範圍或範圍範圍的微粒是否是存在範例,識別和歧視微粒的特定亞人口在這個範例內的經常是更加重要的。 NanoSight 技術能够有選擇性分析這樣人口通過,例如,使用抗體斡旋的螢光標記。 此途徑允許這個用戶檢測,分析和計數螢光被標記的抗體束縛仅的特定 nanoparticles,通過使用被排除的背景未指明的微粒物質適當的光過濾器。 當可以使用時 fluorophores 的範圍,使用最佳的結果的高效率,高穩定性數量小點 (QDot®) 是有利的標籤。

這在顯示從數量小點散發的熒光光一種唯一電視結構激發與 NanoSight 儀器符合一個藍色激光二極管的圖 2A 被展示。 這些數量小點用於標記抗體 (對目標生物標誌的 NDOG II) 特定在 syncytiotrophoblast microvesicle (STBM)。

圖 2. A) 從通過抗體附有的數量小點的熒光圖像 STBM 微粒。 B) 從分散的光 (藍色),正確的抗體 (紅色) 和不正確 (控制) 抗體 (綠色) 的粒度分佈。 注意編號濃度垂直軸。

圖 2B 顯示三大小分佈顯示: i) 所有微粒當前在 STBM 範例 (藍線) 如檢測 (非瑩光的) 光消散, ii) 的微粒螢光 QDot 被標記的 NDOG II 抗體特別地一定,作為評定在熒光模式 (紅線) 下和 iii) 包括類似被標記的 QDot 被標記的抗體的控制 (綠線) 沒有親合力於在 STBM 的目標生物標誌 (也評定在熒光模式下)。 這向顯示微粒的大部分當前在這個範例是順利地和特別地由 STBM 特定 Q 小點NDOG II 抗體標記的,并且這個控制順利地顯示了一個非常低信號。

彙總

NanoSight 技術可能順利地估量,并且計數 microvesicles 和 exosomes 以低濃度和,當使用與螢光標籤一道,可能選擇性地確定和分析微粒的特定類型在一個複雜範例內的。

此信息是來源,覆核和適應從 NanoSight 提供的材料。

對於更多信息请請參觀 NanoSight

Date Added: Oct 17, 2010 | Updated: Mar 7, 2013

Last Update: 7. March 2013 11:31

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