표적으로 한 패치 죄기 - 죄기 미크론 이하 구조물에 패치를 적용하는 이온 전도력 현미경 검사법을 사용하는 -

AZoNano의

목차

표적으로 한 패치 죄기에 소개
표적으로 한 패치 죄기의 사용할 수 있는 원리
표적으로 한 패치 죄기를 위한 기계 사용
견본과 방법
표적으로 한 패치 죄기의 이온 채널 기록
참고
저자
공원 시스템에 관하여

표적으로 한 패치 죄기에 소개

특정 패치 (TPC)1 죄는 위치에 피펫을 인도하기 위하여 이온 (ICM)2 전도력 현미경 검사법으로 죄는 표적으로 한 패치 죄는 결합 패치. 패치 죄는 것은 기술이 연구원이 그 세포에 있는 단 하나 다중 이온 채널 통신로를 검토하기 것을 허용하기 때문에 전기 생리학에 있는 신경 cardiomyocites 및 근육섬유와 같은 흥분하기 쉬운 세포의 연구 결과에 생명 입니다. 그러나 패치 죄는 것은 세포 표면의 가까이에 패치 죔쇠의 피펫을 기동시키기 위하여 사용되는 통합한 광학적인 현미경의 해결책 한계 때문에 세포 표면에 작은 세포 또는 미크론 이하 규모 구조물에 적용될 수 없습니다. ICM가 동일 패치 죄기 피펫을 사용하여 미크론 이하 가늠자에 세포 표면을 확인하기 수 있기 때문에, TPC는 광학 해상 장애물을 극복하고, 매우 패치 죔쇠의 응용성 및 고아한 기술 저쪽에 그것의 정확도를 향상합니다. 이 서류에서는, 살아있는 쥐 심실 cardiomyocyte 세포는 공원 ICM를 사용하여 죄는 표적으로 한 패치로 검토되었습니다. 이온 채널 통신로 신호는 심실 cardiomyocyte에 선택된 Z 강저 위치에 성공적으로 기록되었습니다.

표적으로 한 패치 죄기의 사용할 수 있는 원리

TPC의 요지는 미크론 이하 가늠자 탐지를 위한 ICM를 사용하여 작은 셀 방식 구조물에 죄는 패치를 능력을 발휘하기 위한 것입니다. ICM는 동일 피펫을 이용하고 ICM 화상 진찰 최빈값에 있는 공원 XEP 제어 소프트웨어를 사용하여 세포 지세를 검출하기 위하여 죄는 전통적인 패치와 함께 사용된 전기 회로는 피드백 제어로, 고해상 세포 지세 취득됩니다. 일단 패치 죄기를 위한 흥미로운 구조물이 ICM 화상 진찰을 통해 확인되면, ICM Z 스캐너는 구조물에 피펫을 둡니다. giga 옴 물개는 흡입을 적용해서 형성됩니다. 이온 채널 통신로 기록은 전통적인 패치 죄기에서 것과 같이 그 때 능력을 발휘할 수 있습니다. 피펫이 나노미터 가늠자 정밀도를 가진 수직 방향에 있는 세포 표면에 접근하기 때문에, TPC는 전통적인 패치 죄기에서 사용된 기울은 접근과 비교된 agiga 옴 물개를 만들기의 확율을 향상합니다3.

표적으로 한 패치 죄기를 위한 사용할 수 있는 단계의 숫자 1. 삽화: (a) 공원 ICM는 cardiomycyte 세포 표면의 지세를 취득합니다. (b) nano 피펫은 선택한 지구 (z 강저)에 ICM의 XY 스캐너에 의해 있습니다. (c) 현재 신호를 여는 채널 통신로를 기록하기 위하여 giga 옴이 밀봉하는 양식 및 nano 피펫 접근.

표적으로 한 패치 죄기를 위한 기계 사용

TPC를 실행하기 위하여는, ICM는 패치 죔쇠 시스템과 피펫 및 그것의 이오니아 전류 회로를 공유해서 통합됩니다. ICM는 패치 죔쇠의 이온 현재 검출기 (전치 증폭기.)에서 화상 진찰을 위한 이오니아 현재 신호를 수신합니다. nano 피펫이 이오니아 현재에 의하여 흘러 관통합니다, 패치 죔쇠의 증폭기에 의해 검출되고, 그 때 2로 분할됩니다: ICM 세포 화상 진찰 (피드백 제어)를 위해 1개와 전기생리학 기록을 위해 그 외.

표적으로 한 패치 죄기의 숫자 2. 윤곽: (a) 축삭 Axopatch 200B와 통합되는 XE 생물 ICM. (b) XE 생물 ICM와의 패치 죔쇠 연결의 개요 도표.

견본과 방법

살아있는 쥐 심실 cardiomyocyte 세포는 이전에 기술되는 것과 같이 고립되었습니다4. 세포는 및 NaOH를 가진 PH 7.4에 맞춘 29 Manitol 120 NaCl 의 5.4 KCl, 5 MgSO, 0.2 CaCl4, 5 Na Pyryvate2로, 5.5 포도당, 20 황소자리, 10 Hepes 구성된 채워진 붙이는 것이, 목욕 해결책으로 폴리스티렌 세포 배양 접시에 허용되었습니다. 피펫 채우는 해결책은 목욕 해결책과 동일하. 살아있는 세포 심상은 ICM-ARS 최빈값에서 취득되었습니다5. ICM에 사용된 피펫은 붕규산 유리 (O.D., 1.0 mm, I.D., 0.58 mm 의 길이 90 mm에서 당겨졌습니다; 워너 계기, 지휘관 레이저 기지를 둔 micropipette 끌어당기는 사람2 (P-2000 의 Sutter 계기, Novato, 미국)를 사용하는 미국). 피펫의 안 직경은 대략 500 nm이었습니다.

숫자 3. (a) 광학적인 심상 (최고 삽입물) 및 살아있는 쥐 심실 cardiomyocyte의 ICM 지세. 작은 빨간 원형은 패치 죄는 것이 능력을 발휘한 Z 강저 구조물을 표시합니다. (b) 세포의 현재 대기병 (붙어 있는 ±0 mV의 전압에 기록하는 3.45 pA). (c) 기록된 채널 통신로의 전도력 측정. 전도력은 44 pS이고, 안으로 정류기 K 채널 통신로이기 위하여 추정되었습니다.

표적으로 한 패치 죄기의 이온 채널 기록

숫자 3은 ICM를 사용하여 죄는 표적으로 한 패치의 보기를 보여줍니다. ICM 지세는 세부사항과 전형적인 Z 강저를, 명확하게 설명합니다. ICM 지세 심상에서 선정된 Z 강저 구조물 (빨간 원형)에 위치에, 우리는 붙어 있던 세포 기록을 검토하고 ±0 mV의 전압에 성공적으로 대략 3.45 pA의 일시 현재를 측정했습니다. 이 결과는 공원 XE 생물 ICM가 적절하다는 것을을 위해 딱 들어맞는다는 것을 모두 세포막에 죄는 표적으로 하 및 패치를 표시합니다. ICM는 미융모와 같은 정세포 subcellular 구조물 및 본래 조직, 기관 및 두뇌6 조각 같이 불투명한 세포 조차와 같은 작은 세포에 대한 연구를 위해 특히 유용합니다.

참고

1. J. Gorelik, G. Yuchun 그 외 여러분 Biophys. J. 83, 3296 (2002년)
2. P.K. Hansma, B. 드레이크, O. Marti, S.A. Gould, C.B. Prater 의 과학 243, 641 (1989년)
3. O.P. Hamill, A. Marthy, E. Neher, B. Sakmann, F.J. Sigworth, J. Physiol. 391, 85 (1981년)
4. S.E. Harding, G. Vescovo, M. Kirby, S.M. 죤스, J. Gurden, 및 P.A. Poole 윌슨, J.Mol. 세포. Cardiol. 20. 635 (1988년).
5. C. Myunghoon 의 XE 생물 응용 주 1 의 공원 시스템 (2012년)
6. G. Yuchun, G. Julia, 그 외 여러분 FASEB J. 16, 748 (2002년)

저자

Myung Hoon Choi 의 불쾌한 감상 Eun Jung (공원 시스템, 서울, 한국의 연구 제품 관리, 연구 & 발달)

공원 시스템에 관하여

공원 시스템은 nanoscale 연구와 산업 응용의 도전적인 문제를 위해 주요한 나노 과학 해결책 파트너가 됩니다입니다.

공원 시스템은 가장 정확한 nanoscale 측정을 본래와 혁신적인 AFM 해결책을 제공합니다. nanoscale 도량형학에서는, 반복 가능 인 데이터가 있는 것은, 재생 가능한 및 믿을 수 있는 고해상도 달성 처럼 것으로 결정적입니다. 전통적인 piezotube와 관련되었던 비선형성과 비 직교성을 극복하는 nanometrology의 새로운 시대에서 안내된 혁신적인 누화 제거 (XE) 도량형학 플래트홈은 시스템을 기지를 두었습니다. 공원 시스템 혁신적인 AFM 기술은 혼란을 일으키는 시장력이고 전통적인 AFM 기술의 한계 저쪽에 nanometrology의 응용을 확장합니다.

이 정보는 공원 계속 시스템에 의해 제공된 물자에서 sourced, 검토해서 그리고 적응시켜 입니다.

이 근원에 추가 정보를 위해, 공원 시스템을 방문하십시오.

Date Added: May 11, 2012 | Updated: Sep 20, 2013

Last Update: 20. September 2013 06:25

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