Riktat Lappa att Klämma Fast - genom Att Använda JonConductanceMicroscopy för Att Applicera Lappa att Klämma Fast till Under-Mikronen Strukturerar

vid AZoNano

Bordlägga av Tillfredsställer

Inledning till Riktat Lappar att Klämma Fast
Den Fungerande Principen av Riktat Lappar att Klämma Fast
Instrumentation för Riktat Lappar att Klämma Fast
Tar Prov och Metoder
Jonen Kanaliserar Inspelning av Riktat Lappar att Klämma Fast
Hänvisar till
Författare
Om Parkera System

Inledning till Riktat Lappar att Klämma Fast

Riktat lappa att klämma fast (TPC)1 sammanslutningar lappar att klämma fast med jonconductancemicroscopy (ICM)2 som vägleder pipetten till en närmare detalj, lappar att klämma fast placerar. Lappa att klämma fast är livsviktigt till studien av lättretada celler liksom neurons, cardiomyocites, och muskelfiber i electrophysiology, därför att tekniken låter forskare undersöka singel- eller multipeljonen, kanaliserar i de celler. Men lappa att klämma fast kan inte appliceras till lilla celler, eller submicron-att storleksanpassa strukturerar på cellen ytbehandlar, upplösningen begränsar tack vare av det inkorporerade optiska mikroskopet, som är den van vid manövern som, lappaklämmans pipette nära cellen ytbehandlar. Ytbehandla på submicronfjäll som använder samma, lappar att klämma fast pipetten, Därför Att ICM kan identifiera cellen, övervinner förbättrar TPC häcken för optisk upplösning och väldeliga användbarheten av lappa klämmer fast och dess exakthetsdet okända den klassiska tekniken. I detta pappers- levande tjalla ventricular cardiomyocyteceller undersöktes med riktat lappar att klämma fast genom att använda en ParkeraICM. Jonen kanaliserar signalerar antecknades lyckat på ett valt Z räfflar läge på den ventricular cardiomyocyten.

Den Fungerande Principen av Riktat Lappar att Klämma Fast

Den huvudsakliga idén av TPC är att utföra lappar att klämma fast på litet cell- strukturerar genom att använda ICM för submicron-fjäll upptäckt. ICMEN använder den samma pipetten, och elkraften går runt använt med traditionellt lappar att klämma fast som avkänner celltopografin genom att använda för att Parkera XEP, kontrollerar programvara i ICMEN som avbildar funktionsläget, topografi för kickupplösningscell, fås med återkoppling kontrollerar. En Gång strukturerar intressera för lappar att klämma fast identifieras via ICM som avbildar, bildläsaren för ICM Z, placerar pipetten på strukturera. Enohm förseglar bildas, genom att applicera sugning. Jonen kanaliserar inspelning kan därefter utföras som i konventionellt lappar att klämma fast. Ytbehandla i lodlinjeriktningen med nanometerfjällprecision, TPC förbättrar probabilityen av danandeagiga-ohmen förseglar jämfört med lutad att närma sig använt i konventionellt lappar att klämma fast, Därför Att pipetten att närma sig cellen3.

Figurera 1. Illustrationen av det fungerande kliver för riktat lappar att klämma fast: (a) Parkera ICM får topografin av cardiomycytecellen ytbehandlar. (b) Nano-pipetten placeras på den valda regionen (z räfflar), av XY bildläsaren av ICMEN. (c) Nano-pipetten att närma sig och bildar enohm förseglar för att anteckna kanaliseraöppningsströmmen signalerar.

Instrumentation för Riktat Lappar att Klämma Fast

Att genomföra TPC, integreras ICMEN med en lappa klämmer fast systemet, genom att dela pipetten, och dess ionic ström går runt. ICM mottar den ionic strömmen signalerar för att avbilda från lappaklämmans avkännaren för strömmen för jon (förförstärkare.). Den ionic strömmen flödar till och med nano-pipetten, avkänns den av lappaklämmans förstärkare, och därefter delas den in i två: en för ICM-cellen som avbildar (återkoppling kontrollerar) och annat för den electrophysiological inspelningen.

Figurera 2. Konfigurationen av riktat lappar att klämma fast: (a) XE-Bio ICM som integreras med Axonen Axopatch 200B. (b) Ett schematiskt diagram av lappar klämmer fast anslutning med XE-Bio ICM.

Tar Prov och Metoder

Live tjaller ventricular cardiomyocyteceller isolerades som föregående beskrivit4. Celler var tillåtna att fästa till disk för polystyrencellkultur som fylldes med badlösningar som komponerades av 120 NaCl, 5,4 KCl, 5 MgSO4, 0,2 CaCl2, 5 Na-Pyryvate, 5,5 Glukos, 20 Taurine, 10 Hepes och 29 Manitol som justerades till PH 7,4 med NaOH. Var den fyllnads- lösningen för Pipetten samma som badlösningen. En levande cell avbildar ficks i ICM--ARSfunktionsläge5. Pipetten som användes för ICMEN, drogs från borosilicateexponeringsglas (O.D., 1,0 en mm, ID., 0,58 en mm, en mm för längd 90; Warner Instrumenterar, US) som använder2 enbaserad micropipettepuller (P-2000, Sutter Instrumenterar, Novato, US). Den inre diametern av pipetten var omkring 500 nm.

Figurera 3. (a) Optiskt avbilda (överträffar inlägg), och ICM-topografi av ett levande tjaller ventricular cardiomyocyte. Det små rött cirklar indikerar att ett Z räfflar strukturerar var lappa att klämma fast utfördes. (b) Strömtransienten (pA 3,45) av cellen fäste och att anteckna på spänning av ±0 millivolt. (c) Conductancemätningen av antecknad kanaliserar. Conductancen är 44 pS och beräknades för att vara inre-tillrättaren K kanaliserar.

Jonen Kanaliserar Inspelning av Riktat Lappar att Klämma Fast

Figurera 3 shows som ett exempel av riktat lappar att klämma fast genom att använda ICM. ICM-topografi illustrerar typisk Z räfflar klart, med specificerar. På placera på Zet räffla strukturerar (rött cirkla), utvalt från ICM-topografin avbildar, undersökte mätte vi den fäste cellinspelningen och lyckat en övergående ström av pA omkring 3,45 på en spänning av ±0 millivolt. Detta resultat indikerar Parkerar att som, brunn-passas XE-Bio ICM för både preciserar att uppsätta som mål och lappar att klämma fast på cellmembranet. ICMEN är speciellt användbar för forskning på lilla celler liksom spermaceller, subcellular strukturerar liksom microvilli6, och även gillar täckande celler intakt silkespapper, luftstrupen och hjärnskivor.

Hänvisar till

1. J. Gorelik, G. Yuchun o.a. Biophys. J. 83, 3296 (2002)
2. P.K. Hansma, B. Anka, O. Marti, S.A. Gould, C.B. Prater, Vetenskap 243, 641 (1989)
3. O.P. Hamill, A. Marthy, E. Neher, B. Sakmann, F.J. Sigworth, J. Physiol. 391 85 (1981)
4. S.E. Harding, G. Vescovo, M. Kirby, S.M. Jones, J. Gurden och P.A. Poole-Wilson, J.Mol. Cell. Cardiol. 20. 635 (1988).
5. C. Noterar Myunghoon, denBio Applikationen 1, Parkerar System (2012)
6. G. Yuchun, G. Julia, o.a. FASEB J. 16, 748 (2002)

Författare

Myung Hoon Choi, Smet Eun Jung (ForskningProduktLedning, Forskning & Utveckling av Parkerar System, Seoul, Korea),

Om Parkera System

Parkera System är de ledande nanotechnologylösningarna blir partner med för de mest utmana problemen av nanoscaleforskning och industriella applikationer.

Parkera System ger original- och innovativa AFM-lösningar för den exaktaste nanoscalemätningen. I nanoscalemetrology är att ha data, som är repeatable, reproducible och pålitligt precis så avgörande som att uppnå som är med hög upplösning. Den innovativa crosstalk-elimineringen (XE) metrologyplattformen som visades i en ny era av nanometrologyen, som övervinner non-linjäriteter och non-orthogonality som är tillhörande med konventionell piezotube, baserade system. Parkera System som innovativ AFM-teknologi är ett splittra marknadsför styrka, och den utvidgar den applikationen av nanometrologydet okända begränsar av konventionell AFM-teknologi.

Denna information har varit sourced, granskad och anpassad från material förutsatt att av Park System.

Behaga besök Parkerar System För mer information på denna källa.

Date Added: May 11, 2012 | Updated: Sep 20, 2013

Last Update: 20. September 2013 06:29

Ask A Question

Do you have a question you'd like to ask regarding this article?

Leave your feedback
Submit