Proyección De Imagen de Micropatterns Químicos en el Policarbonato para la Inmovilización del Péptido

Temas Revestidos

Extracto
Introducción
Preparación de Diapositivas
Resultados
Resultados de la Fluorescencia
Resultados de SARFUS
Discusión de Resultados
Conclusión
Ventajas de SARFUS

Extracto

En este estudio, un nuevo método se describe para las superficies micropatterning del policarbonato para los estudios biomoleculares de la acción recíproca. La técnica de Sarfus permite la caracterización rápida de los micropatterns y revela un efecto del buñuelo que esperanzadamente tenga un efecto de menor importancia sobre la imagen de la fluorescencia.

Introducción

El Policarbonato (PC) es ampliamente utilizado como substrato en la preparación de dispositivos microfluidic. Debido al uso potencial de compact-disc como plataformas para el análisis de la alto-producción de acciones recíprocas biomoleculares, el utilitario de la PC para el bioanalysis ha atraído recientemente mucha atención.

En este artículo, un nuevo método para micropatterning químico de un substrato del policarbonato está señalado (el cuadro 1). Los nanoparticles del Sílice (1) functionalized con los grupos del semicarbazide fueron impresos en la PC usando un microarrayer piezoeléctrico sin contacto para dar micropatterns (2). Los grupos del semicarbazide presentes en los micropatterns eran sitio-específico ligado con los péptidos desprotegidos (3) derivatizados por - un grupo oxo del aldehido, para dar el substrato (4): los péptidos conectaron a los micropatterns a través de bonos del semicarbazone. La superficie entre las manchas fue dejada sin cambios.

El uso de los nanoparticles de diversos diámetros (27 a 304 nanómetro) permiso la influencia de la curvatura superficial en la fuerza de señal y la especificidad de la captura que se estudiarán. La capa del nanoparticle en el substrato de la PC fue caracterizada usando Sarfus.

Cuadro 1. el micropatterning Químico de la superficie del policarbonato para la inmovilización específica del sitio de péptidos.

Preparación de Diapositivas

Los nanoparticles del sílice de Semicarbazide (1) fueron preparados de los nanoparticles del sílice de diversos diámetros (27, 82, 151, 192, 256 y 304nm) e impresos en las diapositivas de la PC (75 X.25 x 1 milímetro) usando un arrayer piezoeléctrico sin contacto (tres caídas, ~1 NL totales).

Las diapositivas impresas de la PC fueron incubadas bajo el tapa-cristal con los péptidos COCHO-HA o COCHO-FLAG, y entonces los anticuerpos de anti-HA o del anti-INDICADOR siguieron por los anticuerpos secundarios tetramethylrhodamine-etiqueta.

Resultados

Resultados de la Fluorescencia

El análisis de la Fluorescencia (datos no mostrados) muestra la alta especificidad de la captura de anti-HA o - SEÑALE los anticuerpos por medio de una bandera por los péptidos inmovilizados y ese las señales más altas fueron obtenidas para 82 - y 27 nanoparticles del nanómetro, probablemente debido a una superficie específica más alta.

Resultados de SARFUS

Los micropatterns formados imprimiendo nanoparticles del semicarbazide en un substrato de la PC también fueron caracterizados por Sarfus.

Para este análisis, una Resaca con un toplayer del policarbonato (llamado PC de la Resaca del `') fue utilizada. Los experimentos Preliminares demostraron la inercia del disolvente en el toplayer.

El análisis de Sarfus no mostró ningún cambio importante en la talla o la altura del micropattern antes y después de las diversas incubaciones, significando que ningún desorbtion del nanoparticle ocurrió durante los diversos pasos de progresión del lavado y de la incubación, y que el espesor del micropattern es dictado principal por el espesor de la capa del nanoparticle.

Para la medición de Sarfus, una calibración se realiza a partir de la 4' - el cristal líquido del cyanobiphenyl del n-octilo 4 (8CB) que forma espontáneamente las estructuras de múltiples capas bien definidas con la altura del paso de progresión de 32Å (Figuras 2A y 2B). La Figura 2C muestra la imagen de Sarfus de un micropattern incubado con el péptido de COCHO-FLAG, el anticuerpo del anti-INDICADOR y los anticuerpos finalmente tetramethylrhodaminelabelled del antimurine de la cabra.

Discusión de Resultados

Cuadro 2. A) imagen de Sarfus de la caída 8CB en la resaca de la PC. B) Perfil Extraído a lo largo de la línea de puntos en (a). C) Imagen de Sarfus del micropattern de los nanoparticles de los semicarbazides 27nm. D) Perfil Extraído a lo largo de la línea de puntos en (c). E) ido da correspondencia entre la intensidad de la fluorescencia y los colores. Imagen de la Fluorescencia del micropattern mostrado en C). La Escala en izquierda da correspondencia entre la intensidad de la fluorescencia y los colores.

En la Figura 2C, la mancha visualiza a anillo-como depósito a lo largo de su perímetro probablemente debido la migración de macizo dispersos a la periferia de la caída durante la evaporación líquida. Las 27 capas del nanómetro-nanoparticle dentro del micropattern tienen una altura media de 5,3 nanómetro.

Como otras técnicas ópticas, la técnica de Sarfus es sensible a la cantidad de la materia por la superficie de la unidad. Así, medición de Sarfus de una partícula compacta (capa monomolecular del radio R) (relación de transformación del compacity de 0,74) daría un espesor de la capa de 0.74R. El resultado obtenido en este estudio sugirió una relación de transformación del compacity de cerca de 0,4 (5,3/13.5) que llevaba a una distancia media entre los nanoparticles cerca de su diámetro (27nm).

Comparando imágenes en Sarfus (figura 2C) y el modo de la fluorescencia (figura 2E), uno puede ver que la distribución del buñuelo de los nanoparticles visualizados usando Sarfus tiene un efecto de menor importancia sobre la homogeneidad de la imagen de la fluorescencia. Esta observación sugiere que solamente la capa externa del micropattern sea accesible al péptido o al anticuerpo.

Conclusión

Un nuevo método para micropatterning químico del policarbonato basado en la impresión de los nanoparticles functionalized del sílice está señalado. Las capturas Específicas del anticuerpo se prueban.

La técnica de Sarfus permitió la caracterización fácil de un micropattern entero y la determinación del espesor de la capa del nanoparticle.

Ventajas de SARFUS

Las ventajas de Sarfus en esta aplicación incluyen:

  • Visualización Rápida del modelo en superficie
  • No contacto no etiqueta técnica
  • Campo visual (a partir del ² del 60μm al ² de varios milímetros) para los resultados estadísticos
  • Analice en la temperatura ambiente y la presión atmosférica

Fuente: Nanolane

Para más información sobre esta fuente visite por favor Nanolane

Date Added: Jun 3, 2012 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 14. June 2013 09:51

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