Représentation des Micropatterns Chimiques sur le Polycarbonate pour l'Immobilisation de Peptide

Sujets Couverts

Résumé
Introduction
Préparation des Guides
Résultats
Résultats de Fluorescence
Résultats de SARFUS
Examen des Résultats
Conclusion
Avantages de SARFUS

Résumé

Dans cette étude, une méthode neuve est décrite pour les surfaces micropatterning de polycarbonate pour des études biomoléculaires d'interaction. La technique de Sarfus permet la caractérisation rapide des micropatterns et indique un effet de beignet qui exerce si tout va bien un effet moins important sur l'image de fluorescence.

Introduction

Le Polycarbonate (PC) est très utilisé comme substrat dans la préparation des dispositifs microfluidic. En Raison de l'utilisation potentielle des compacts discs comme plates-formes pour l'analyse de haut-débit des interactions biomoléculaires, l'installation du PC pour le bioanalysis a récent attiré beaucoup d'attention.

En cet article, une méthode neuve pour micropatterning chimique d'un substrat de polycarbonate est enregistrée (le schéma 1). Des nanoparticles de Silice (1) functionalized avec des groupes de semicarbazide ont été estampés sur le PC à l'aide d'un microarrayer piézoélectrique de non contact pour donner des micropatterns (2). Les groupes de semicarbazide actuels sur les micropatterns étaient site-particulier ligaturé avec des peptides non protégés (3) dérivatisés par - un oxo groupe d'aldéhyde, pour donner le substrat (4) : les peptides ont lié aux micropatterns par des obligations de semicarbazone. La surface entre les endroits a été laissée inchangée.

L'utilisation des nanoparticles des différents diamètres (27 à 304 nanomètre) a permis l'influence de la lordose extérieure sur la spécificité de force du signal et de capture à étudier. La couche de nanoparticle sur le substrat de PC a été caractérisée à l'aide de Sarfus.

Le Schéma 1. micropatterning Chimique de la surface de polycarbonate pour l'immobilisation particulière de site des peptides.

Préparation des Guides

Des nanoparticles de silice de Semicarbazide (1) ont été préparés à partir des nanoparticles de silice des différents diamètres (27, 82, 151, 192, 256 et 304nm) et ont été estampés sur les guides de PC (75 X.25 X 1 millimètre) à l'aide d'un arrayer piézoélectrique de non contact (trois gouttes, ~1 Pays-Bas totaux).

Les guides estampés de PC ont été incubés sous la panneau-glace avec des peptides COCHO-HA ou COCHO-FLAG, et puis les anticorps d'anti-HA ou d'anti-INDICATEUR ont suivi des anticorps secondaires tetramethylrhodamine-étiquetés.

Résultats

Résultats de Fluorescence

L'analyse de Fluorescence (données non affichées) affiche la spécificité élevée de la capture d'anti-HA ou - MARQUEZ les anticorps par les peptides immobilisés et ce les signes les plus élevés ont été obtenus pour 82 - et 27 nanoparticles de nanomètre, probablement dus à une surface particulière plus élevée.

Résultats de SARFUS

Les micropatterns constitués en estampant des nanoparticles de semicarbazide sur un substrat de PC ont été également caractérisés par Sarfus.

Pour cette analyse, un Ressac avec un toplayer de polycarbonate (nommé PC de Ressac de `') a été utilisé. Les expériences Préliminaires ont expliqué l'inertie du solvant sur le toplayer.

L'analyse de Sarfus n'a affiché aucune évolution important dans la taille ou la hauteur du micropattern avant et après les différentes incubations, signifiant qu'aucun desorbtion de nanoparticle ne s'est produit pendant les différentes phases de lavage et d'incubation, et que l'épaisseur du micropattern est principalement dictée par l'épaisseur de la couche de nanoparticle.

Pour la mesure de Sarfus, un étalonnage est exécuté de 4' - le cristal liquide du cyanobiphenyl du n-octyle 4 (8CB) qui forme spontanément les structures multicouche bien définies avec la hauteur de phase de 32Å (Figures 2A et 2B). La Figure 2C affiche l'image de Sarfus d'un micropattern incubé avec du peptide de COCHO-FLAG, l'anticorps d'anti-INDICATEUR et les anticorps finalement tetramethylrhodaminelabelled d'antimurine de chèvre.

Examen des Résultats

Le Schéma 2. A) image de Sarfus de la goutte 8CB sur le ressac de PC. B) Profil Extrait suivant le trait pointillé en (a). C) Image de Sarfus de micropattern de nanoparticles des semicarbazides 27nm. D) Profil Extrait suivant le trait pointillé en (c). E) parti donne la correspondance entre l'intensité de fluorescence et les couleurs. Image de Fluorescence du micropattern affiché en C). L'Échelle sur la gauche donne la correspondance entre l'intensité de fluorescence et les couleurs.

Dans la Figure 2C, l'endroit affiche un dépôt en forme d'anneau le long de son périmètre probablement dû le transfert des solides dispersés de la périphérie de la goutte pendant l'évaporation liquide. Les 27 couches de nanomètre-nanoparticle à l'intérieur du micropattern ont une moyenne hauteur de 5,3 nanomètre.

Comme d'autres techniques optiques, la technique de Sarfus est sensible à la quantité de substance selon la surface d'ensemble. Ainsi, mesure de Sarfus d'une particule compacte (couche unitaire de radius R) (taux de compacity de 0,74) donnerait une épaisseur de couche de 0.74R. Le résultat obtenu en cette étude a suggéré un taux de compacity environ de 0,4 (5,3/13.5) menant à une moyenne distance entre les nanoparticles près de leur diamètre (27nm).

En comparant des images dans Sarfus (chiffre 2C) et le mode de fluorescence (chiffre 2E), un peut voir que la distribution de beignet des nanoparticles conçus utilisant Sarfus exerce un effet moins important sur la homogénéité de l'image de fluorescence. Cette observation suggère que seulement la couche externe du micropattern soit accessible au peptide ou à l'anticorps.

Conclusion

Une méthode neuve pour micropatterning chimique du polycarbonate basé sur l'impression des nanoparticles functionalized de silice est enregistrée. Les captures Particulières de l'anticorps est prouvée.

La technique de Sarfus a permis la caractérisation facile d'un micropattern entier et la détermination de l'épaisseur de couche de nanoparticle.

Avantages de SARFUS

Les avantages de Sarfus dans cette application comprennent :

  • Visualisation Rapide de configuration sur la surface
  • Non contact étiquetant non la technique
  • Champ de vision (du ² de 60μm au ² de plusieurs millimètres) pour des résultats statistiques
  • Analysez à la température ambiante et à la pression atmosphérique

Source : Nanolane

Pour plus d'informations sur cette source visitez s'il vous plaît Nanolane

Date Added: Jun 3, 2012 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 14. June 2013 09:18

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