Imagem Lactente de Micropatterns Químicos no Policarbonato para a Imobilização do Peptide

Assuntos Cobertos

Sumário
Introdução
Preparação das Corrediças
Resultados
Resultados da Fluorescência
Resultados de SARFUS
Exame dos Resultados
Conclusão
Vantagens de SARFUS

Sumário

Neste estudo, um método novo é descrito para superfícies micropatterning do policarbonato para estudos biomoleculares da interacção. A técnica de Sarfus permite a caracterização rápida dos micropatterns e revela um efeito da filhós que tenha esperançosamente um efeito menor na imagem da fluorescência.

Introdução

O Policarbonato (PC) é amplamente utilizado como uma carcaça na preparação de dispositivos microfluidic. Devido ao uso potencial dos compacts disc como plataformas para a análise da alto-produção de interacções biomoleculares, o serviço público do PC para o bioanalysis tem atraído recentemente muita atenção.

Neste artigo, um método novo para micropatterning químico de uma carcaça do policarbonato é relatado (figura 1). Os nanoparticles do Silicone (1) functionalized com grupos do semicarbazide foram imprimidos no PC usando um microarrayer piezoeléctrico noncontact para dar micropatterns (2). Os grupos do semicarbazide actuais nos micropatterns eram local-específico ligado com os peptides desprotegidos (3) derivatized - por um grupo oxo do aldeído, para dar a carcaça (4): os peptides ligaram aos micropatterns através das ligações do semicarbazone. A superfície entre os pontos foi deixada inalterada.

O uso dos nanoparticles dos diâmetros diferentes (27 a 304 nanômetro) permitiu a influência da curvatura de superfície na força de sinal e na especificidade da captação a ser estudadas. A camada do nanoparticle na carcaça do PC foi caracterizada usando Sarfus.

Figura 1. micropatterning Químico da superfície do policarbonato para a imobilização específica do local dos peptides.

Preparação das Corrediças

Os nanoparticles do silicone de Semicarbazide (1) foram preparados dos nanoparticles do silicone dos diâmetros diferentes (27, 82, 151, 192, 256 e 304nm) e imprimidos nas corrediças do PC (75 X.25 x 1 milímetro) usando um arrayer piezoeléctrico noncontact (três gotas, ~1 NL totais).

As corrediças impressas do PC foram incubadas sob o tampa-vidro com peptides COCHO-HA ou COCHO-FLAG, e então os anticorpos de anti-HA ou de anti-BANDEIRA seguiram por anticorpos secundários tetramethylrhodamine-etiquetados.

Resultados

Resultados da Fluorescência

A análise da Fluorescência (dados não mostrados) mostra a especificidade alta da captação do anti-HA ou - EMBANDEIRE anticorpos por peptides imobilizados e esse os sinais os mais altos foram obtidos para 82 - e 27 nanoparticles do nanômetro, provavelmente devido a uma área de superfície específica mais alta.

Resultados de SARFUS

Os micropatterns formados imprimindo nanoparticles do semicarbazide em uma carcaça do PC foram caracterizados igualmente por Sarfus.

Para esta análise, uma Ressaca com um toplayer do policarbonato (denominado PC da Ressaca do `') foi usada. As experiências Preliminares demonstraram a inércia do solvente no toplayer.

A análise de Sarfus não mostrou nenhuma mudança significativa no tamanho ou na altura do micropattern antes e depois das incubação diferentes, significando que nenhum desorbtion do nanoparticle ocorreu durante as etapas diferentes da lavagem e da incubação, e que a espessura do micropattern está ditada principalmente pela espessura da camada do nanoparticle.

Para a medida de Sarfus, uma calibração é executada de 4' - o cristal líquido do cyanobiphenyl do noctyl 4 (8CB) que forma espontâneamente estruturas bem definidas da multi-camada com altura da etapa de 32Å (Figuras 2A & 2B). A Figura 2C mostra a imagem de Sarfus de um micropattern incubado com peptide de COCHO-FLAG, anticorpo da anti-BANDEIRA e os anticorpos finalmente tetramethylrhodaminelabelled do antimurine da cabra.

Exame dos Resultados

Figura 2. A) imagem de Sarfus da gota 8CB na ressaca do PC. B) Perfil Extraído ao longo da linha pontilhada em (a). C) Imagem de Sarfus do micropattern dos nanoparticles dos semicarbazides 27nm. D) Perfil Extraído ao longo da linha pontilhada em (c). E) saido dá a correspondência entre a intensidade da fluorescência e as cores. Imagem da Fluorescência do micropattern mostrado em C). A Escala na esquerda dá a correspondência entre a intensidade da fluorescência e as cores.

Na Figura 2C, o ponto indica um depósito em forma de anel ao longo de seu perímetro provavelmente devido a migração de sólidos dispersados à periferia da gota durante a evaporação líquida. As 27 camadas do nanômetro-nanoparticle dentro do micropattern têm uma altura média de 5,3 nanômetro.

Como outras técnicas ópticas, a técnica de Sarfus é sensível à quantidade de matéria pela área de superfície da unidade. Assim, medida de Sarfus de uma partícula compacta (monolayer do raio R) (relação do compacity de 0,74) daria uma espessura da camada de 0.74R. O resultado obtido neste estudo sugeriu uma relação do compacity de aproximadamente 0,4 (5,3/13.5) que conduzem a uma distância média entre nanoparticles perto de seu diâmetro (27nm).

Comparando imagens em Sarfus (figura 2C) e modo da fluorescência (figura 2E), um pode ver que a distribuição da filhós dos nanoparticles visualizados usando Sarfus tem um efeito menor na homogeneidade da imagem da fluorescência. Esta observação sugere que somente a camada externo do micropattern seja acessível ao peptide ou ao anticorpo.

Conclusão

Um método novo para micropatterning químico do policarbonato baseado na impressão de nanoparticles functionalized do silicone é relatado. As captações Específicas do anticorpo são provadas.

A técnica de Sarfus permitiu a caracterização fácil de um micropattern inteiro e a determinação da espessura da camada do nanoparticle.

Vantagens de SARFUS

As vantagens de Sarfus nesta aplicação incluem:

  • Visualisation Rápido do teste padrão na superfície
  • Não contacto que etiqueta não a técnica
  • Campo de visão (do ² de 60μm ao ² de diversos milímetros) para resultados estatísticos
  • Analise na temperatura ambiente e na pressão atmosférica

Source: Nanolane

Para obter mais informações sobre desta fonte visite por favor Nanolane

Date Added: Jun 3, 2012 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 14. June 2013 09:44

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