Воображение Химических Micropatterns на Поликарбонате для Обездвиживания Пептида

Покрытые Темы

Конспект
Введение
Подготовка Скольжений
Результаты
Результаты Флуоресцирования
Результаты SARFUS
Обсуждение Результатов
Заключение
Преимущества SARFUS

Конспект

В этом изучении, новый метод описан для micropatterning поверхностей поликарбоната для биомолекулярных изучений взаимодействия. Метод Sarfus позволяет быстрой характеризации micropatterns и показывает влияние донута которое многообещающе имеет небольшое влияние на изображении флуоресцирования.

Введение

Поликарбонат (PC) широко использован как субстрат в подготовке microfluidic приборов. Должно к потенциальной пользе компактов-дисков как платформы для анализа высок-объём биомолекулярных взаимодействий, общее назначение ПК для bioanalysis недавно привлекало много внимания.

В настоящей статье, сообщен новый метод для химический micropatterning субстрата поликарбоната (диаграмма 1). Nanoparticles Кремнезема (1) functionalized с группами semicarbazide были напечатаны на ПК путем использование внеконтактного пьезоэлектрического microarrayer для того чтобы дать micropatterns (2). Группы semicarbazide присутствующие на micropatterns было местом-специфическ перевязанным при незащищенные пептиды (3) derivatized - oxo группой альдегида, для того чтобы дать субстрат (4): пептиды соединили к micropatterns через скрепления semicarbazone. Поверхность между пятнами была выйдена неизменным.

Польза nanoparticles различных диаметров (27 до 304 nm) позволила влияние поверхностной погнутости на характерности силы сигнала и захвата, котор нужно изучить. Слой nanoparticle на субстрате ПК был охарактеризован путем использование Sarfus.

Диаграмма 1. Химический micropatterning поверхности поликарбоната для обездвиживания места специфического пептидов.

Подготовка Скольжений

Nanoparticles кремнезема Semicarbazide (1) были подготовлены от nanoparticles кремнезема различных диаметров (27, 82, 151, 192, 256 и 304nm) и были напечатаны на скольжениях ПК (75 X 25 x 1 mm) путем использование внеконтактного пьезоэлектрического arrayer (3 падений, ~1 nL полного).

Напечатанные скольжения ПК были инкубированы под защитным прозрачным стеклом с пептидами COCHO-HA или COCHO-FLAG, и после этого антитела анти--HA или анти--ФЛАГА следовать tetramethylrhodamine-обозначенными вторичными антителами.

Результаты

Результаты Флуоресцирования

Флуоресцентный анализ (не показанные данные) показывает высокую характерность захвата анти--HA или - FLAG антитела лишенными подвижности пептидами и т самые высокие сигналы были получены для 82 - и 27 nanoparticles nm, вероятно должных к более высокой удельной поверхности.

Результаты SARFUS

Micropatterns сформированные путем печатать nanoparticles semicarbazide на субстрате ПК также были охарактеризованы Sarfus.

Для этого анализа, был использован Прибой при термин toplayer поликарбоната (ПК Прибоя `'). Предварительные эксперименты продемонстрировали инерцию растворителя на toplayer.

Анализ Sarfus не показал никакие значительные изменения в размере или высоте micropattern перед и после различными инкубациями, что никакое desorbtion nanoparticle не произошло во время различных шагов запитка и инкубации, и что толщина micropattern главным образом продиктована толщиной слоя nanoparticle.

Для измерения Sarfus, тарировка выполнена от 4' - кристалл cyanobiphenyl noctyl- 4 (8CB) жидкостный который формирует самопроизвольно чёткие разнослоистые структуры с высотой шага 32Å (Диаграмм 2A & 2B). На Диаграмму 2C показано изображение Sarfus micropattern инкубированного с пептидом COCHO-FLAG, антителом анти--ФЛАГА и окончательно tetramethylrhodaminelabelled антителами antimurine козочки.

Обсуждение Результатов

Диаграмма 2. A) Изображение Sarfus падения 8CB на прибое ПК. B) Извлеченный профиль вдоль пунктирной линии внутри (A). C) Изображение Sarfus micropattern nanoparticles semicarbazides 27nm. D) Извлеченный профиль вдоль пунктирной линии внутри (C). Выйденный E) дает корреспонденцию между интенсивностью флуоресцирования и цветами. Изображение Флуоресцирования micropattern показанного в C). Маштаб на левой стороне дает корреспонденцию между интенсивностью флуоресцирования и цветами.

В Диаграмме 2C, пятно показывает a кольц-как залемь вдоль своего периметра вероятно должного переселение разметанных твердых тел к периферии падения во время жидкостного испарения. 27 слоев nm-nanoparticle внутри micropattern имеет среднюю высоту 5,3 nm.

Как другие оптически методы, метод Sarfus чувствительн к количеству дела в единицу площади поверхности. Таким Образом, измерение Sarfus компактного монослоя частицы (радиуса R) (коэффициента compacity 0,74) дало бы толщину слоя 0.74R. Результат полученный в этом изучении предложил коэффициент compacity около 0,4 (5,3/13.5) водя к среднему расстоянию между nanoparticles близко к их диаметру (27nm).

Путем сравнивать и изображения в Sarfus (диаграмме 2C) и режим флуоресцирования (диаграммы 2E), одно смогите увидеть что распределение донута nanoparticles визуализированных используя Sarfus имеет небольшое влияние на гомогенности изображения флуоресцирования. Это замечание предлагает что только внешний слой micropattern доступн к пептиду или к антителу.

Заключение

Сообщен новый метод для химический micropatterning поликарбоната основанный на печатании functionalized nanoparticles кремнезема. Специфические захваты антитела доказаны.

Метод Sarfus позволил легкой характеризации всего micropattern и определению толщины слоя nanoparticle.

Преимущества SARFUS

Преимущества Sarfus в этом применении включают:

  • Быстрое визуализирование картины на поверхности
  • Non контакт non обозначая метод
  • Область видимости (от ² 60μm к ² нескольких mm) для статистически результатов
  • Проанализируйте на комнатной температуре и атмосферном давлении

Источник: Nanolane

Для больше информации на этом источнике пожалуйста посетите Nanolane

Date Added: Jun 3, 2012 | Updated: Jun 11, 2013

Last Update: 14. June 2013 09:48

Ask A Question

Do you have a question you'd like to ask regarding this article?

Leave your feedback
Submit