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Posted in | Nanomedicine | Nanoanalysis

Zählungsund BearbeitenViren Unter Verwendung NanoSight-Instrumente

Published on June 2, 2009 at 7:50 AM

Die Fähigkeit des NanoSight-Instrumentes zu zählen und Größenviren und ihre Gesamtheiten in der flüssigen Suspension wird zu denen in zunehmendem Maße wichtig, die in die Entwicklung von Virenimpfstoffen mit einbezogen werden.

Virenimpfstoffe fallen unter 2 Hauptkategorien:

  • Leben (verminderte) Impfstoffe
  • Beendete (inaktivierte) Impfstoffe

Ein verminderter Liveimpfstoff ist einer, wo die Giftigkeit des Virus verringert worden ist, so, dass, wenn der Impfstoff zum Patienten verabreicht wird, er eine Immunreaktion verursacht, ohne klinische Krankheit zu verursachen. Das Virus wiederholt innerhalb des Hauptrechners und liefert folglich Immunität über einen längeren Zeitraum. Die Mehrheit von erfolgreichen Virenimpfstoffen fallen unter Kategorie einschließlich Impfstoffe für Masern, Mumps, Röteln, Grippe, Gelbfieber und Poliomyelitis.

Inaktivierte Viren werden, in den Fällen wo ein passender verminderter Impfstoff nicht entwickelt worden ist, oder in den Fällen wo das Virus wahrscheinlich wahrscheinlich ist, vom verminderten Formular zurückzukehren, in ein virulenteres Formular des Virus verwendet. Das Virus kann nicht innerhalb des Gehäuses wiederholen und folglich gibt es gewöhnlich eine niedrigere Hauptrechnerantwort zum Impfstoff und häufig mehrfache Dosen werden gefordert. Die höchst Common inaktivierten Virenimpfstoffe umfassen typhusartiges, Tollwut und Poliomyelitis.

NanoSights Rolle im Virusreinigungsprozeß
Die Entwicklung von Virenimpfstoffen benötigt Viren, in den Livezellen gezüchtet zu werden, geerntet zu werden und dann gereinigt zu werden. Impfhersteller sind interessiert, an, die Reinheit der Virenvorbereitung zu überwachen in verschiedenen Schlüsselstadien des Reinigungsprozesses und verstehen die Konzentration des Virusmaterialgeschenkes. Es gibt, wo das NanoSight-Instrument Sachwert hinzufügt. Der Partikel-durchpartikel Anflug an das Bearbeiten und die Zählung von Viren kann Viren von den größeren Zelltrümmer leicht unterscheiden und Zahlverteilungen der hohen Auflösung können verwendet werden, um die Anzahl von Viren gegen die Anzahl von Virusgesamtheiten zu berechnen. Die Konzentration von den Viren Zu Schätzen, die vorhanden sind, ist wesentlich, wenn man den Verlust des Produktes an jedem Schritt des Reinigungsprozesses (und kann versteht folglich, verwendet werden, um den Prozess im Hinblick auf Produktausbeute zu optimieren) und auch Viruskonzentration ist wesentlich beim Versuchen, Dosierung im Endprodukt zu verstehen.

Leben Sie gegen Gesamtvirentiter und Vergleich mit Ansteckungsfähigkeitswertbestimmungen
Die Fähigkeit der NanoSight-Technik, ein Virus zu sortieren und zu zählen, ob sie Live- oder inaktiv ist, erlaubt den Benutzern, eine Idee der relativen Konzentrationen der ansteckenden Partikel gegen Gesamtpartikel zu erhalten, wenn sie in Verbindung mit Ansteckungsfähigkeitswertbestimmungen verwendet wird. Ansteckungsfähigkeitswertbestimmungen wie Plakettenwertbestimmungen sind die weit verbreitetste Technik, zum von Livevirentitern in der Impffertigung zu schätzen. Um ansteckende Virentiter genau mengenmäßig zu bestimmen, beruhen diese Techniken auf einem einzelnen virion, das eine Einzelzelle in einer Kultur, nachfolgende Wiederholung infiziert und Infektion von umgebenden Zellen veranlaßt eine Plakette sich zu bilden die dann mengenmäßig bestimmt werden kann.

Offenbar benötigen diese Wertbestimmungen das Virus, ansteckend zu sein und da so nicht für inaktivierte Impfstoffe anwendbar sind. Diese Wertbestimmungen erklären nicht Viren, die Ansteckungsfähigkeit während des Reinigungsprozesses in einem verminderten Liveimpfstoff verloren haben. Als solches denn verminderte Liveimpfstoffe, schwankt ein Virentiter, wie durch eine Ansteckungsfähigkeitswertbestimmung berechnet beträchtlich vom Gesamtvirentiter, wie durch die NanoSight-Technik gezählt. Es wird häufig gefunden, dass das Verhältnis von ansteckendem zu den nicht-ansteckenden Partikeln sich unterscheiden kann ist 2 oder sogar 3 Größenordnungen so, dass Verhältnis von ansteckenden Viren 1/1000 des Gesamtpartikelinhalts ist. Dieses hat klare Auswirkungen, wenn das Verständnis der Wirksamkeit des Herstellungsverfahrens und der Schritte gemacht werden kann, um die Produktausbeute zu verbessern und zu optimieren, die auf NanoSight-Daten basiert. Ähnlich nach Verwaltung des Endprodukts, verursacht das Vorhandensein von nicht-ansteckenden Viren auch eine Immunreaktion (gemäß eines inaktivierten Impfstoffs), einen Faktor, der betrachtet werden muss, wenn es Dosierung im Endprodukt versteht.

Verständnisanhäufung von Viren
Die NanoSight-Technikmaßnahme-Teilchengröße auf einer Partikel-durchpartikel Basis und als solcher kann Teilchengrößeverteilungen der hohen Auflösung erzeugen. Die Korngrößenverteilung kann verwendet werden, um relative Konzentrationen von monomerem gegen das geansammelte Material zu schätzen wegen der Tatsache, dass die Maßnahme-Teilchengröße der Technik nicht nur aber die Anzahl von Partikeln einer spezifischen Größe zählt. Der qualitative Aspekt der Technik stellt auch einen schnellen Einblick in den Aggregatzustand zur Verfügung, wie in den Bildern unten gesehen werden kann. Das erste Bild zeigt eine in hohem Grade gereinigte Vorbereitung des Grippevirus, während das zweite Bild eine Probe mit einem hohen Maß Anhäufung zeigt. Unabhängiger einer Zahlverteilung, der Benutzer kann den Aggregatzustand innerhalb einer Vorbereitung schnell und zuverlässig verstehen.

Ansteckungsfähigkeitswertbestimmungen sind nicht imstande, zwischen angesammeltem und nicht-angesammeltem Material in einer Virenvorbereitung zu unterscheiden. Eine Plakette, die Gerät bildet, ist möglicherweise ein einzelnes virion oder eine einzelne Gesamtheit, die viele möglicherweise ansteckenden Viren enthalten. Wenn verabreichtes angesammeltes Virenmaterial Degesamtheit in vivo und als solches kann, unterschätzt möglicherweise eine Ansteckungsfähigkeitswertbestimmung Brutto- den ansteckenden Vireninhalt innerhalb einer Vorbereitung.

Zusammenfassung

  • Die NanoSight-Technik kann als Hilfsmittel verwendet werden, um den Gesamtvireninhalt mengenmäßig zu bestimmen und kann neben Ansteckungsfähigkeitswertbestimmungen verwendet werden, um die relativen Konzentrationen von ansteckendem zu den nicht-ansteckenden Viren in einem verminderten Liveimpfstoff zu berechnen
  • Die NanoSight-Technik wird ideal entsprochen, um Virentiter in inaktivierten Impfstoffen zu berechnen - Ansteckungsfähigkeitswertbestimmungen können nicht für diese Impfstoffe verwendet werden
  • Virenkonzentrationen sind wichtig beim Versuchen, Produktausbeute, Immunreaktion und mögliche allergienherbeiführende Reaktion auf den Impfstoff zu verstehen
  • Der Aggregatzustand an jedem Schritt des Herstellungsverfahrens und im Endprodukt und wird unter Verwendung der NanoSight-Technik geüberwacht und gemessen
  • Ansteckungsfähigkeitswertbestimmungen haben keine Fähigkeit, einzelne virions von angesammeltem Virenmaterial zu unterscheiden

Last Update: 14. January 2012 03:58

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