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Posted in | Nanomedicine | Nanoanalysis

Vírus de Contagem e de Execução Sob Medida Usando Instrumentos de NanoSight

Published on June 2, 2009 at 7:50 AM

A capacidade do instrumento de NanoSight vírus para contar e de tamanho e seus agregados na suspensão líquida está tornando-se cada vez mais importante para aquelas envolvidas na revelação de vacinas virais.

As vacinas Virais caem sob 2 categorias principais:

  • Vivem as vacinas (atenuadas)
  • Vacinas (neutralizadas) Matadas

Uma vacina atenuada viva é um onde a virulência do vírus foi reduzida, tal que quando a vacina é administrada ao paciente, induz uma resposta imune sem causar a doença clínica. O vírus replicate dentro do anfitrião e daqui fornecerá a imunidade por um período de tempo prolongado. A maioria de vacinas virais bem sucedidas cai sob a categoria que inclui vacinas para o sarampo, a papeira, a rubéola, a gripe, a febre amarela e a poliomielite.

Os vírus Neutralizados são usados nos casos onde uma vacina atenuada apropriada não foi desenvolvida ou nos casos onde o vírus é provavelmente provável reverter do formulário atenuado, em um formulário mais virulento do vírus. O vírus não pode replicate dentro do corpo e daqui há tipicamente uma resposta mais baixa do anfitrião à vacina e as doses frequentemente múltiplas são exigidas. Mais as vacinas virais neutralizadas terra comum incluem tifóide, a raiva e a poliomielite.

O papel de NanoSight no processo da purificação do vírus
A revelação de vacinas virais exige vírus ser cultivada em pilhas vivas, ser colhida e refinado então. Os fabricantes Vacinais estão interessados em monitorar a pureza da preparação viral em várias fases chaves do processo da purificação e compreendem a concentração de presente do material do vírus. Há onde o instrumento de NanoSight adiciona o valor real. A aproximação da partícula-por-partícula a fazer sob medida e a contar vírus pode facilmente distinguir vírus dos restos de pilha maiores e as distribuições de alta resolução do número podem ser usadas para calcular o número de vírus contra o número de agregados do vírus. Calcular a concentração de vírus actuais é essencial em compreender a perda de produto em cada etapa do processo da purificação (e daqui pode ser usado para aperfeiçoar o processo em termos do rendimento de produto) e igualmente a concentração do vírus é essencial ao tentar compreender a dosagem no produto final.

Viva contra o titre e a comparação virais totais com os ensaios da infectividade
A capacidade da técnica de NanoSight para fazer sob medida e contar um vírus se é viva ou inactiva permite que os usuários obtenham uma ideia das concentrações relativas de partículas infecciosos contra partículas totais quando usada conjuntamente com ensaios da infectividade. Os ensaios da Infectividade tais como ensaios da chapa são a técnica a mais amplamente utilizada para calcular titres virais vivos na fabricação vacinal. Para determinar exactamente titres virais infecciosos, estas técnicas confiam em um único virion que contamina uma única pilha em uma cultura, réplica subseqüente e a infecção de pilhas circunvizinhas faz com que uma chapa forme que possa então ser determinada.

Claramente estes ensaios exigem o vírus ser infeccioso e porque tais não são aplicáveis para vacinas neutralizadas. Estes ensaios não esclarecem os vírus que perderam a infectividade durante o processo da purificação em uma vacina atenuada viva. Como tal, porque vacinas atenuadas vivas, um titre viral como calculado por um ensaio da infectividade variará consideravelmente do titre viral total como contado pela técnica de NanoSight. Encontra-se freqüentemente que a relação de infeccioso às partículas não-infecciosos pode variar seja 2 ou mesmo 3 ordens de grandeza tais que a relação de vírus infecciosos é 1/1000 do índice total da partícula. Isto tem implicações claras, quando compreender a eficácia do processo de manufactura e etapas pode ser feita para melhorar e aperfeiçoar o rendimento de produto baseado em dados de NanoSight. Similarmente em cima da administração do produto final, a presença de vírus não-infecciosos igualmente induzirá uma resposta imune (conforme uma vacina neutralizada), um factor que precise de ser considerado ao compreender a dosagem no produto final.

Agregação Compreensiva dos vírus
O tamanho de partícula das medidas da técnica de NanoSight em uma base da partícula-por-partícula e como esta'n pode gerar distribuições de tamanho de alta resolução da partícula. A distribuição de tamanho pode ser usada para calcular concentrações relativas de monomeric contra o material agregado devido ao facto de que o tamanho de partícula das medidas da técnica não somente mas conta o número de partículas de um tamanho específico. O aspecto qualitativo da técnica igualmente fornece uma introspecção rápida no estado de agregação, como pode ser visto nas imagens abaixo. A primeira imagem mostra uma preparação altamente refinada do virus da gripe enquanto a segunda imagem mostra uma amostra com um alto nível da agregação. Independente de uma distribuição do número, o usuário pode rapidamente e confiantemente compreender o estado de agregação dentro de uma preparação.

Os ensaios da Infectividade são incapazes de distinguir entre o material agregado e não-agregado em uma preparação viral. Uma chapa que forma a unidade pode ser um único virion ou um único agregado que contêm muitos vírus potencial infecciosos. Se o material viral agregado administrado pode de-agregado in vivo e como tal, um ensaio da infectividade pode bruta subestimar o índice viral infeccioso dentro de uma preparação.

Sumário

  • A técnica de NanoSight pode ser usada como a ferramenta para determinar o índice viral total e pode ser usada ao lado dos ensaios da infectividade para calcular as concentrações relativas de infeccioso aos vírus não-infecciosos em uma vacina atenuada viva
  • A técnica de NanoSight é serida idealmente para calcular titres virais em vacinas neutralizadas - os ensaios da infectividade não podem ser usados para estas vacinas
  • As concentrações Virais são importantes ao tentar compreender o rendimento de produto, a resposta imune e a reacção alergénica potencial à vacina
  • O estado de agregação em cada etapa do processo de manufactura e no produto final e seja monitorado e medido usar a técnica de NanoSight
  • Os ensaios da Infectividade não têm nenhuma capacidade para discriminar únicos virions do material viral agregado

Last Update: 14. January 2012 01:54

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